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专利号: 2021116433845
申请人: 广东省科学院健康医学研究所
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2026-10-13
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种非酒精性脂肪性肝病模型构建的方法,包含以下步骤:S1:将原代肝细胞贴附培养;

S2:将肝星状细胞或人皮肤成纤维细胞消化后离心并弃去上清;

S3:将步骤S2中肝星状细胞或人皮肤成纤维细胞接种至S1培养的肝细胞中诱导培养。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S1的具体操作为:将重悬的原代肝细

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胞按7.5~10.5×10/cm的密度贴附培养。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S1所述的贴附培养的培养液为包含胰岛素的低糖培养液;

优选地,所述胰岛素的浓度为3.125~9.375μg/mL;优选的,所述低糖培养液为DMEM低糖培养液。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S3所述的诱导培养的分化培养液为包含胰岛素的高糖培养液;

优选地,所述胰岛素的浓度为3.125~9.375μg/mL;优选的,所述高糖培养液为DMEM高糖培养液。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S1中所述的原代肝细胞来源于人、大鼠、小鼠或兔子。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S3中所述的肝星状细胞或人皮肤成纤维细胞与肝细胞的数目比为1:(1~6)。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S1中所述的贴附培养条件为36~38℃;

20~28h。

8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S3中所述的诱导培养的条件为36~38℃;10~15天。

9.权利要求1~8任一项所述的方法构建的非酒精性脂肪性肝病模型在(I)或(II)中的应用:

(I)用于肝脂肪变性发病过程、机制及非酒精性脂肪性肝病疾病进程的研究;

(II)筛选用于预防、治疗非酒精性脂肪性肝病和/或肝脂肪变性疾病药物。

10.一种筛选非酒精性脂肪性肝病药物的方法,使用权利要求1~8任一所述的方法制备的模型进行药物筛选。