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专利号: 2019102799191
申请人: 闽江学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组刺参胶原多肽,其特征在于,编码所述重组刺参胶原多肽的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。

2.一种重组刺参胶原多肽的质粒,其特征在于,所述质粒中包含权利要求1中所述的重组刺参胶原多肽的核苷酸序列。

3.一种表达重组刺参胶原多肽的基因工程菌,其特征在于,包含权利要求2所述的质粒。

4.一种权利要求1中所述重组刺参胶原多肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、克隆基因:获得人工合成的重组刺参胶原多肽的核苷酸序列;

S2、构建载体质粒:用限制性内切酶切割载体质粒,使重组刺参胶原多肽的核苷酸序列和载体质粒具有相同粘性末端,然后通过DNA连接酶将目的基因序列整合到载体质粒中,并将整合质粒导入至感受态基因工程菌中;

S3、发酵及菌体收集:选取所述步骤S2中获得的阳性基因工程菌克隆,置于培养基中培养至菌体达目标浓度,然后收集菌体;

S4、纯化与透析:将所述步骤S3中收集到的菌体去除杂质后,进行蛋白纯化操作,再进行蛋白透析操作。

5.根据权利要求4所述的重组刺参胶原多肽的制备方法,其特征在于,所述步骤S4中的蛋白纯化操作具体包括:将菌体用Resuspension Buffer 重悬,离心,弃上清;在菌体沉淀中加入5倍体积Buffer B,反复吹打直至菌体溶液均一,离心,收集上清;用装有Ni-NTA柱的FPLC系统进行纯化,上柱后,用含有咪唑的Elution Buffer进行洗脱并收集洗脱液。

6.根据权利要求5所述的重组刺参胶原多肽的制备方法,其特征在于,所述步骤S4中的蛋白透析操作具体包括:用蒸馏水稀释所述纯化操作中收集的洗脱液至10倍体积;将稀释后的洗脱液转移到500 Da的半透膜中,用蒸馏水进行透析,每隔12小时换一次透析液,重复

3-5次后获得重组刺参胶原多肽溶液。

7.根据权利要求4所述的重组刺参胶原多肽的制备方法,其特征在于,还包括步骤S5检测:将纯化与透析后获得的重组刺参胶原多肽溶液进行质谱检测。

8.根据权利要求4至7中任意一项中制备获得的重组刺参胶原多肽产品及其在护肤品领域的应用。

9.一种刺参胶原多肽抗皱霜,其特征在于,包括以下重量份的各组分:A相:60-75份水;

B相:3-6份植物角鲨烷,8-12份霍霍巴油,0.3-0.6份的茉莉精油,0.2-0.6份维生素E;

C相:8-12份的透明质酸,0.8-1.2份的海藻糖,2-3份的烟酰胺,0.2-0.8份的胶原多肽;

D相:0.5-1.2份乳化剂;

其中所述胶原多肽为权利要求4至7任意一项中制备所得的重组刺参胶原多肽。

10.一种权利要求8所述刺参胶原多肽抗皱霜的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)按照重量份比例称取A相,然后将C相的各组分按重量份比例称量好并依次溶于A相中,得混合液1;

(2)按重量份比例称取B相中各组分,混合后得混合液2;

(3)将所述步骤(2)中制得混合液2缓缓加入所述步骤(1)的混合液1中,轻轻搅拌,加入按重量份比例称量好的D相,然后置于均质乳化机1000rpm反应10min,得到抗皱霜成品,无菌条件下分装保存。