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专利号: 2018800079876
申请人: 江南大学
专利类型:其他
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种普鲁兰酶,其特征在于,所述普鲁兰酶的氨基酸序列包括,在母本氨基酸序列的基础上,将母本氨基酸序列上含有的FNDXXRDXXXGXXF中最后一位F(苯丙氨酸)进行突变后得到的氨基酸;其中X可以是任意天然存在的氨基酸;且环糊精对普鲁兰酶的抑制作用相对于母本显著降低。

2.根据权利要求1所述的普鲁兰酶,其特征在于,所述母本氨基酸序列是来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Bacillus vireti、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)、莫哈韦氏杆菌(Bacillus mojavensis)、Thermotoga maritima、嗜盐短杆菌([Brevibacterium]halotolerans)、Thermus sp.IM6501、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus FRI-35)、嗜盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans)、Alteromonas mediterranea、Klebsiella pneumoniae、Thermotoga maritima、Escherichia coli、Enterobacter aerogenes、Bacillus tequilensis、Bacillus intestinalis、Bacillales、Bacillus licheniformis、Bacillus halotolerans中的任意一种的普鲁兰酶的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的普鲁兰酶,其特征在于,所述普鲁兰酶的氨基酸序列包括以下任意一段氨基酸序列:(1)将来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis str.168)的普鲁兰酶氨基酸序列的第476位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列;

(2)将来源于Bacillus vireti的普鲁兰酶氨基酸序列的第476位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列;

(3)将来源于萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)的普鲁兰酶氨基酸序列的第476位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列;

(4)将来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)的普鲁兰酶氨基酸序列的第481位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列;

(5)将来源于莫哈韦氏杆菌(Bacillus mojavensis)的普鲁兰酶氨基酸序列的第476位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列;

(6)将来源于Thermotoga maritima的普鲁兰酶氨基酸序列的第601位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列;

(7)将来源于嗜盐短杆菌([Brevibacterium]halotolerans)的普鲁兰酶氨基酸序列的第478位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列;

(8)将来源于Thermus sp.IM6501的普鲁兰酶氨基酸序列的第481位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列;

(9)将来源于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus FRI-35)的普鲁兰酶氨基酸序列的第

613位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列;

(10)将来源于嗜盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans)的普鲁兰酶氨基酸序列的第

476位的氨基酸苯丙氨酸发生突变后得到的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的普鲁兰酶,其特征在于,所述母本氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

5.根据权利要求1~4任一所述的普鲁兰酶,其特征在于,所述环糊精为α-CD、β-CD、γ-CD中的一种或多种。

6.根据权利要求1~4任一所述的普鲁兰酶,其特征在于,所述最后一位F氨基酸苯丙氨酸是突变成如下氨基酸中的任意一种:甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸。

7.编码权利要求1-6任一所述普鲁兰酶的核苷酸。

8.含有权利要求7所述核苷酸的载体或者细胞。

9.根据权利要求8所述的细胞,其特征在于,所述宿主菌为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌或酵母菌。

10.一种降低环糊精对普鲁兰酶抑制作用的方法,其特征在于,所述方法是对母本普鲁兰酶进行突变;其中,突变后的普鲁兰酶,其氨基酸序列包括,在母本氨基酸序列的基础上将母本氨基酸序列上含有的FNDXXRDXXXGXXF中最后一位F(苯丙氨酸)进行突变后得到的氨基酸;其中X可以是任意天然存在的氨基酸。