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专利号: 2018101819244
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种降低普鲁兰酶对环糊精敏感性的方法,其特征在于所述方法通过对普鲁兰酶与环糊精相互作用的关键氨基酸进行理性突变,制得普鲁兰酶突变体,改变普鲁兰酶与环糊精之间的相互作用,从而降低普鲁兰酶对环糊精的敏感性;

所述关键氨基酸为与环糊精之间存在疏水或氢键作用的氨基酸;

所述突变体为W437G、H477A或D465G;

所述理性突变的具体过程为:

(1)以普鲁兰酶基因为模板,选用质粒,构建表达载体,制得携带普鲁兰酶基因的质粒;

(2)确定普鲁兰酶与环糊精结合的关键氨基酸位点;

(3)设计关键氨基酸的突变引物,以携带普鲁兰酶基因的质粒为模板进行突变,制得突变后的质粒;

(4)将突变后的质粒转入宿主菌,选取阳性单克隆发酵培养,得到普鲁兰酶突变体酶液,经过分离纯化,制得所述普鲁兰酶突变体。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(1)中所述质粒为PMC系列、pET系列或pGEX系列中的一种。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(4)中所述宿主菌为革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌或真菌。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(4)中所述宿主菌为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌或酵母菌。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(4)中所述分离纯化的方法为亲和层析法、疏水层析法、超滤层析法或凝胶过滤层析法。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述环糊精为α‑CD、β‑CD、γ‑CD中的一种或多种。