1.一种基于荧光共振能量转移(FRET)辨别DNA碱基长度并检测单链DNA结合蛋白(SSB)的荧光传感方法,具体步骤如下:
(1)将85~95μL浓度为3~4mM阳离子共轭聚合物(CCP)与0.5~2μL浓度为0.5~2mM铱配合物混合,然后加入0.05~0.15M pH6.8~7.6的PBS缓冲溶液,得到用于检测SSB的基于CCP与铱配合物FRET效应的荧光传感器体系。检测荧光强度,计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值I530/I415。
(2)a.加入1~3μL 5~15μM的DNA到步骤(1)中的体系,检测荧光强度的变化,计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值I530/I415;b.加入1~3μL 5~15μM的发卡DNA到步骤(1)中的体系,检测荧光强度的变化,计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值I530/I415。
注:a部分的实验步骤用于不同碱基数量DNA的检测;b部分的实验步骤用于SSB的检测。
(3)不同浓度的SSB加入到步骤(2)中,然后加入缓冲溶液,30~40℃下温育5~15min,检测荧光强度的变化,计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值(I530/I415)即荧光共振能量转移效率,获得一系列不同浓度的SSB对应的荧光强度比值,建立荧光强度比值与SSB浓度之间的定量关系;根据这个定量关系可以检测样品中SSB的未知浓度。
2.根据权利要求1所述的一种基于FRET辨别DNA碱基长度及检测SSB的荧光传感方法,其特征在于第一次利用铱配合物和CCP之间的FRET现象较好地实现DNA碱基长度的辨别以及SSB的高敏检测。
3.一种利用权利要求1-(3)中所述的一种辨别DNA碱基长度及检测SSB的荧光传感方法,其特征在于:狭缝宽度为:10nm,激发波长是380nm,扫描电压是700V,检测CCP/DNA/铱配合物体系中CCP(415nm)的荧光强度(I415)与铱配合物(530nm)的荧光强度比值(I530/I415)对不同浓度SSB的定量关系。