1.一种重组羰基还原酶突变体,其特征在于所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6,SEQ ID NO:8之一所示。
2.一种权利要求1所述重组羰基还原酶突变体编码基因,其特征在于所述编码基因核苷酸序列为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.7之一所示。
3.一种由权利要求2所述重组羰基还原酶突变体编码基因构建的重组载体。
4.一种由权利要求3所述重组载体制备的重组基因工程菌。
5.一种权利要求1所述重组羰基还原酶突变体在制备(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯中的应用。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述应用为:以含重组羰基还原酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体超声破碎后提取的纯酶为催化剂,以(S)-
6-氯-5-羟基-3-氧代己酸叔丁酯为底物,以葡萄糖为辅助底物,以葡萄糖脱氢酶为辅酶,于pH值为6-8的缓冲溶液中构成反应体系,在25-35℃、150-500rpm条件下反应,反应完全,将反应液分离纯化,获得(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述催化剂用量以湿菌体重量计为3-50g/L缓冲溶液,所述底物的初始浓度为10-1300mmol/L缓冲溶液,所述辅助底物用量为10-
1820mmol/L缓冲溶液,所述葡萄糖脱氢酶用量以含葡萄糖脱氢酶基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体重量为计为3-50g/L缓冲溶液。
8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将含有重组羰基还原酶突变体编码基因的工程菌接种至含终浓度50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基,37℃,
150rpm下培养8h,再以体积浓度1%接种量接种至新鲜的含有终浓度50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中,于37℃,150rpm下培养至菌体OD600达0.6-0.8,加入终浓度为0.1mM的IPTG,
28℃下诱导培养12h后,4℃、8000×g离心10min,弃去上清液,收集湿菌体。
9.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述反应体系中还添加有机溶剂,所述有机溶剂为水溶性有机溶剂或非水溶性有机溶剂,所述水溶性有机溶剂终体积添加量为5-15%,所述非水溶液有机溶剂体积终浓度添加量为10-30%,所述水溶性有机溶剂为下列之一:二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、异丙醇、丙酮、乙醇、甲醇、吐温-20、吐温-60或吐温-80;所述非水溶性有机溶剂为下列之一:四氢呋喃、二氯甲烷、叔戊醇、甲苯、二甲苯、正辛醇、正己烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯或甲基叔丁基醚。