1.一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法,其特征在于:包括,对动植物油中甘三酯进行层析分离并收集甘油三酯;
将其用脂肪酶水解后,对水解产物经薄层层析分离,确定α游离脂肪酸并收集进行衍生化处理;
进气相色谱检测,测定甘油三酯中α位脂肪酸的组成及含量;其中,所述脂肪酶为米根霉发酵生产的α特异性脂肪酶,其添加量为甘油三酯质量的5 15%;
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所述脂肪酶水解,还加入MgCl2,且满足添加后Mg2+在混合液中的浓度为3 4mmol/L;
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所述薄层层析分离,其是将硅胶G板置于105℃烘箱中活化1h,然后用0.4mol/L 硼酸溶液饱和处理,自然通风晾干后进行展开,在薄板上均匀喷洒0.2 wt%的2,7-二氯荧光素的甲醇溶液并在紫外灯下显色处理,油酸作为参照标样,确定α-游离脂肪酸在高效薄层色谱上的位置,将α-游离脂肪酸条带刮下,用乙醚提取;
所述进行展开,其中,使用的扩展液为己烷、乙醚、乙酸按体积比为70 80:20 30:0.5 1~ ~ ~的混合液,处理时间为40 50min;
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所述衍生化处理,其是使用氮吹仪将溶剂挥发掉,并向离心管中加入1 2mL 正己烷和 ~
0.5 1mL 1 1.5mol/L的氢氧化钠-甲醇溶液,将混合液涡旋混匀 1min,4000 5000r/min 离~ ~ ~心3 5min,收集上清液。
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2.根据权利要求1所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法,其特征在于:所述层析分离,其是采用硅胶柱层析分离,其中,柱层析洗脱液为石油醚和乙醚,其体积比为80~
90:10~15,洗脱速度为1 3ml/min。
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3. 根据权利要求1或2所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法,其特征在于:所述脂肪酶水解,其是加入脂肪酶、胆酸钠、CaCl2,在37~55℃下,保持15~25min,然后在3000~
5000r/min的条件下,离心5min 。
4. 根据权利要求1所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法,其特征在于:所述进气相色谱检测,其是吸取上清液于进样瓶中,采用气相色谱-氢火焰离子检测,载气为纯度大于99.99%的氮气,载气流速为 1.0mL/min,分流比为100~50∶1,气化室温度 250 300~℃,FID 检测器温度为 250 300℃,进样体积1.0μL,气相色谱柱规格为SP-2560、100m×~
0.25mm、0.20μm毛细管柱。
5. 根据权利要求4所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法,其特征在于:所述气相色谱-氢火焰离子检测分析条件为程序升温,其初始温度为80 100℃,保持2 5 min,以5~ ~ ~
15℃/min 升至160 200℃,保持 2 5 min,再以5 15℃/min升温至210 230 ℃。
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