1.一种α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶,其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码权利要求1所述α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的核苷酸,其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种权利要求1所述α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的制备方法,其特征在于将SEQ ID NO.2所示的DNA片段插入表达载体获得重组质粒,将重组质粒转化宿主菌,经其诱导表达和目的蛋白纯化而得。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在步骤如下:
(1)、以提取的Thermotoga thermarum DSM 5069基因组DNA为模板,用具有SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的下游引物进行PCR扩增,扩增得到SEQ ID NO.2所示的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的DNA片段;
(2)、将得到的DNA片段和载体质粒pET-28a分别用Nco I和Xho I进行双酶切,连接得到含有α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因的重组表达质粒;
(3)、将步骤(2)得到的重组表达质粒转化表达宿主菌JM109(DE3),加入诱导剂于30℃
2+
下诱导表达,离心收集菌体,破碎菌体后经Ni 亲和层析柱纯化即得α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶。
5.包含编码权利要求1所述α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的DNA片段的重组质粒。
6.权利要求1所述α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶在制备人参皂苷Rd中的应用。
7.根据权利要求6所述α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶在制备人参皂苷Rd中的应用,其特征在于所述α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶在pH 4-8,温度40℃-95℃,酶解人参皂苷Rc制备得到人参皂苷Rd。
8.根据权利要求7所述α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶在制备人参皂苷Rd中的应用,其特征在于pH优选为5.5,温度优选为95℃。
9.根据权利要求6所述α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶在制备人参皂苷Rd中的应用,其特征在于包含α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶在与β-葡萄糖苷酶协同作用于Rb1、Rb2、Rc多组分人参皂苷制备稀有人参皂苷中的应用。