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专利号: 2019113840838
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种L-阿拉伯糖异构酶,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种L-阿拉伯糖异构酶突变体,由序列如SEQ ID NO.1所示氨基酸经定点突变而来,所述突变的位点为下列中的一个或多个:(1)第107位、(2)第199位、(3)第59位。

3.如权利要求2所述的L-阿拉伯糖异构酶突变体,其特征在于所述突变体由序列如SEQ ID NO.1所示氨基酸经下列之一或多个位点突变而得:(1)第107位异亮氨酸I突变为丝氨酸S、精氨酸R、丙氨酸A或谷氨酰胺Q;(2)第199位天冬氨酸D突变为色氨酸W、组氨酸H、苯丙氨酸F、天冬氨酸D或半胱氨酸C;

(3)第59位A突变为赖氨酸K、缬氨酸V、苏氨酸T、半胱氨酸C或谷氨酸E。

4.如权利要求2所述的L-阿拉伯糖异构酶突变体,其特征在于所述L-阿拉伯糖异构酶突变体由序列如SEQ ID NO.1所示氨基酸经下列之一或多个位点突变而得:(1)第107位异亮氨酸I突变为谷氨酰胺Q、(2)第199位天冬氨酸D突变为色氨酸W、(3)第

59位丙氨酸A突变为谷氨酸E。

5.如权利要求4所述的L-阿拉伯糖异构酶突变体,其特征在于所述L-阿拉伯糖差向异构酶突变体序列如SEQ ID NO.7所示。

6.权利要求1~5之一所述L-阿拉伯糖异构酶及其突变体在催化D-半乳糖异构化制备D-塔格糖中的应用。

7.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述应用为:以含所述L-阿拉伯糖异构酶或其突变体编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体经超声破碎后获得的上清液或菌体细胞经固定化获得的固定化酶制剂作为催化剂,以D-半乳糖为底物,在Mn2+存在下,在6.0~7.5的MOPS缓冲液中,60~90℃温度下反应,反应结束后,反应液分离纯化,获得D-塔格糖。

8.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述L-阿拉伯糖异构酶编码基因序列如SEQ ID NO.2所示。

9.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述L-阿拉伯糖异构酶突变体编码基因序列如SEQ ID NO.8所示。