1.一种电化学发光化合物,其特征在于,其结构式为:;
其中,n为100~200,R1、R2、R3和R4均选自Y基团和氢基团中的一种,且R1、R2、R3和R4中至少有一个为Y基团,所述Y基团具有以下任意一种结构式:、、、
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2.一种如权利要求1所述的电化学发光化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:将含铱络合物、N,N-二异丙基乙胺、N,N,N',N'-四甲基-O-(N-琥珀酰亚胺)脲四氟硼酸盐溶解于N,N-二甲基甲酰胺中,混匀;
加入聚乙烯亚胺溶液,进行酰胺反应,分离,得到所述电化学发光化合物。
3.如权利要求2所述的电化学发光化合物的制备方法,其特征在于,所述含铱络合物为双齿配体化合物,其结构式为;
其中,M为铱,C^N二齿配体为第一配体,N^N为第二配体,X-为六氟磷酸根;
所述第一配体具有以下任意一种结构式:
、、、、、、;
所述第二配体具有以下任意一种结构式:
、、、。
4.一种如权利要求1所述的电化学发光化合物于制备铱ECL试剂、以及于检测四环素中的应用。
5.一种铱ECL试剂,其特征在于,包括缓冲液以及溶解于所述缓冲液中的如权利要求1所述的电化学发光化合物。
6.一种检测四环素的方法,其特征在于,包括以下步骤:制备铱ECL试剂,所述铱ECL试剂包括缓溶液以及溶解于所述缓溶液中的如权利要求1所述的电化学发光化合物;
建立电化学适体传感器,所述电化学适体传感器包括以工作电极,Ag/AgCl为参比电极,铂丝电极为对电极的三电极体系以及所述铱ECL试剂,其中,所述工作电极为表面负载适配体的玻碳电极,所述适配体上修饰有二茂铁,其中,所述适配体能够与四环素结合并从所述玻碳电极上分离;
建立电化学适体传感器的发光强度与四环素浓度的线性回归方程,所述电化学适体传感器包括所述铱ECL试剂和三电极体系;
将所述工作电极置于含四环素的待测溶液中,孵育后取出,冲洗,将所述工作电极对应的三电极体系置于所述铱ECL试剂中,测试得到电化学适体传感器的检测发光强度,根据所述线性回归方程和所述电化学适体传感器的检测发光强度,确定待测溶液中四环素的浓度。
7.如权利要求6所述的检测四环素的方法,其特征在于,建立电化学适体传感器的发光强度与四环素浓度的线性回归方程的步骤包括:获得多组电化学适体传感器;
将一组所述三电极体系置于一个所述铱ECL试剂中,测试得到电化学适体传感器的空白发光强度;
配置不同浓度的四环素标准溶液,将其余所述电化学适体传感器中的所述工作电极分别插入不同浓度的四环素标准溶液中,孵育后取出,冲洗,再将多个所述工作电极对应的三电极体系分别置于对应的所述电化学适体传感器的铱ECL试剂中,测试得到多组电化学适体传感器的标准发光强度;
根据电化学适体传感器的空白发光强度和多组电化学适体传感器的标准发光强度,获得电化学适体传感器的发光强度与四环素浓度的线性回归方程。
8.如权利要求6所述的检测四环素的方法,其特征在于,所述工作电极的制备步骤包括:将玻碳电极表面接枝羧酸分子层;
接枝有羧酸分子层的玻碳电极浸入在含有cDNA,1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的Tris-HCl中进行酰胺化反应,反应后取出并冲洗;
浸入含适配体的Tris-HCl中进行DNA杂交,取出,冲洗,干燥,得到工作电极;
其中,所述cDNA的碱基序列如SEQ ID NO.1所示的碱基序列,适配体的碱基序列为如SEQ ID NO.2所示的碱基序列。
9.如权利要求8所述的检测四环素的方法,其特征在于,将玻碳电极表面接枝羧酸分子层的步骤包括:将NaNO3和4-氨基苯甲酸溶解于HCl溶液中,在-3~40℃黑暗条件下搅拌3~60min,以产生重氮阳离子;
在扫描电位为+0.6V ~ -0.6V以及以银/氯化银为参比电极的条件下,以50mV/s的扫描速率对玻碳电极进行循环伏安扫描,得到电化学接枝羧酸分子层的玻碳电极。