1.一种具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖的分离纯化方法,其特征在于该方法按以下步骤进行:一、将沙棘干果去除表面杂质,粉碎、过筛,获得沙棘粗粉;石油醚回流提取,此过程需重复2次,每次时间为1h 1.5h;除去沙棘果中含有的脂溶性物质,抽滤,得到沙棘果渣;
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二、按1mg沙棘果渣中加入20 40mL蒸馏水的比例,将沙棘果渣与蒸馏水混合,然后施加~电压进行闪式提取,控制电压为120 190V,提取时间80 130s,提取温度70 90℃,得到提取~ ~ ~液;
三、将提取液过滤、浓缩;然后再向浓缩液中加入无水乙醇,无水乙醇与浓缩液的体积比为4∶1,在温度为4℃条件下醇沉、离心、浓缩、干燥,获得沙棘粗多糖;
四、采用Sevag法对沙棘粗多糖进行脱蛋白处理,获得脱蛋白的沙棘多糖;
五、溶解脱蛋白的沙棘多糖,调pH值至8.0,加入H2O2溶液,脱色1.5~2h,获得脱色的沙棘多糖;
六、将脱色后的沙棘多糖置于透析袋中流水透析24h~48h,再用蒸馏水透析24h~48h;
最后加入质量百分浓度为95%的乙醇,室温醇沉,离心、浓缩、真空干燥,得到沙棘精多糖;
七、配制5mg/mL沙棘精多糖溶液,离心、0.45μm滤膜过滤,然后加入到预平衡好的DEAE‑
52纤维柱中,分别采用浓度为0、0.1、0.3、0.5mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱,控制流速为
0.8mL/min,单管2mL;采用苯酚‑硫酸法在490nm处对洗脱液进行跟踪检测,绘制洗脱曲线,收集0.5mol/L的NaCl溶液的洗脱峰液体;再用蒸馏水透析24h 48h,冷冻干燥;
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八、将沙棘多糖组分溶解于蒸馏水中配制5mg/mL,离心、过滤,然后加入到预平衡好的Sephadex G‑200色谱柱中,采用0.005 mol/L、pH值为 6.2的磷酸盐缓冲液进行洗脱,从而使大小不同的多糖分子得到分离纯化,控制流速为0.8mL/min,单管2mL;采用苯酚‑硫酸法在490nm处对层析液进行跟踪检测,收集单一洗脱峰液体,再用蒸馏水透析24h~48h,冷冻干燥,获得沙棘均一多糖HRP‑3。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖的分离纯化方法,其特征在于步骤二中所述的闪式提取,按1mg沙棘果渣中加入30mL蒸馏水的比例将沙棘果渣与蒸馏水混合,提取电压为180V,提取时间为120s,提取温度为75℃。
3.根据权利要求1或2所述的一种具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖的分离纯化方法,其特征在于步骤三中所述的醇沉的时间为10h 12h。
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4.根据权利要求1或2所述的一种具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖的分离纯化方法,其特征在于,步骤四中所述的Sevag法脱蛋白处理的具体操作为:将沙棘粗多糖配制成饱和水溶液,然后向沙棘粗多糖水溶液中加入Sevag试剂并振荡10min 20min,然后在转速为~
5000rpm的条件下离心10min,弃去固相物,重复2 3次,取上清液浓缩干燥,得脱蛋白的沙棘~多糖;其中所述的 Sevag试剂是用CHCl3与CH3(CH2)3OH按体积比为(3~5):1混合而成的。
5.根据权利要求1或2所述的一种具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖的分离纯化方法,其特征在于,步骤五中所述的H2O2溶液的质量百分浓度为6%~7%,脱色温度为48℃~50℃。
6.根据权利要求1或2所述的一种具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖的分离纯化方法,其特征在于,步骤六中所述的醇沉,是加入3 5倍体积的95%乙醇,在室温下,醇沉20h~24h。
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7.一种具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖,其特征在于具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖由权利要求1至6中任一项所述的分离纯化方法制备所得的沙棘均一多糖HRP‑3。
8.根据权利要求7所述的沙棘均一多糖,其特征在于沙棘均一多糖HRP‑3是由阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、葡萄糖醛酸与半乳糖按摩尔比为1.05:3.56:2.47:1:1.87:0.74构成的多糖。
9.如权利要求7或8所述的沙棘均一多糖的应用,其特征在于该应用是将具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖在制备胃癌和肺腺癌的药物中的应用。