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专利号: 2021112038724
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种金枪鱼鱼卵降血脂肽,其特征在于所述降血脂肽的氨基酸序列为:Pro‑Trp‑Gly‑Ile‑Glu‑Ala‑Leu‑Arg,ESI‑MS测定其分子量为941.1Da。

2.如权利要求1所述一种金枪鱼鱼卵降血脂肽的制备方法,其特征在于所述制备方法通过金枪鱼鱼卵脱脂、高温处理、酶解、超滤、凝胶柱层析及反相高效液相色谱纯化后得到。

3.根据权利要求2所述一种金枪鱼鱼卵降血脂肽的制备方法,其特征在于所述制备方法包括以下步骤:

1)金枪鱼鱼卵预处理:金枪鱼鱼卵匀浆至糊状后,加入乙酸乙酯,搅拌脱脂24h,过滤,干燥,得脱脂金枪鱼鱼卵粉末;取脱脂金枪鱼鱼卵粉末,加入蒸馏水,放于100℃水浴中2~

3h,得脱脂金枪鱼鱼卵粉末溶液;

2)金枪鱼鱼卵的酶解:将步骤1)中脱脂金枪鱼鱼卵粉末溶液调温至35~40℃,调节pH值至1.5~2.0,加入胃蛋白酶,水解解3~5h,于90~100℃、10min灭酶;样品降温至35~45℃时,调节pH值至7.0~8.0,加入胰蛋白酶,反应3~5h,于90~100℃、10min灭酶,冷却至常温,12000rmp离心20min,收集上清液,即金枪鱼鱼卵酶解液;

3)金枪鱼鱼卵降血脂寡肽的制备:将金枪鱼鱼卵酶解液经截留分子量为1kDa、3.5kDa、

5kDa和10kDa的超滤膜进行分级,收集1kDa的组分,冻干,得金枪鱼鱼卵降血脂超滤酶解物,该超滤酶解物依次经凝胶柱层析和反相高效液相色谱(RP‑HPLC)纯化,得到金枪鱼鱼卵降血脂寡肽Pro‑Trp‑Gly‑Ile‑Glu‑Ala‑Leu‑Arg。

4.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血脂肽的制备方法,其特征在于所述步骤1)中的金枪鱼为鲣鱼Katsuwonus pelamis。

5.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血脂肽的制备方法,其特征在于所述步骤1)中匀浆至糊状后的金枪鱼鱼卵与乙酸乙酯的重量体积比g/ml为1:4~1:6。

6.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血脂肽的制备方法,其特征在于所述步骤1)中脱脂金枪鱼鱼卵粉末与蒸馏水的重量体积比g/ml为1:5。

7.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血脂肽的制备方法,其特征在于所述步骤2)中胃蛋白酶的添加量为脱脂金枪鱼鱼卵粉末溶液重量的0.8%~1.5%。

8.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血脂肽的制备方法,其特征在于所述步骤2)中胰蛋白酶的添加量为脱脂金枪鱼鱼卵粉末溶液重量的1.5%~2.0%。

9.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血脂肽的制备方法,其特征在于所述步骤3)的凝胶柱层析和RP‑HPLC纯化的具体过程为:凝胶柱层析:将上述金枪鱼鱼卵降血脂超滤酶解物溶于双蒸水配成浓度为20~25mg/mL的溶液,经过葡聚糖凝胶Sephadex G‑25柱层析分离,用双蒸水进行洗脱,流速0.5~

0.8mL/min,根据220nm下的吸光度制作凝胶层析色谱图,收集各色谱峰,测定个色谱峰组分对HepG2细胞模型中脂质堆积的影响效果,选择降低脂质堆积效果最好的色谱峰组分,冻干,得金枪鱼鱼卵降血脂凝胶层析酶解物;

RP‑HPLC纯化:将上述金枪鱼鱼卵降血脂凝胶层析酶解物用双蒸水配成45~50μg/mL的溶液,利用RP‑HPLC进行纯化,得金枪鱼鱼卵降血脂寡肽Pro‑Trp‑Gly‑Ile‑Glu‑Ala‑Leu‑Arg。

进一步优选,所述RP‑HPLC条件为:进样量5~10μL;色谱柱Kromasil C18(250mm×

4.6mm,5μm);流动相:80%乙腈;洗脱速度0.5~0.8mL/min;紫外检测波长220nm。

10.如权利要求1所述一种金枪鱼鱼卵降血脂肽用于制备降血脂相关疾病的药物中的用途。