1.一种金枪鱼鱼鳔降血脂和抗氧化寡肽,其特征在于所述寡肽的氨基酸序列为His-Ser-Gly-Pro-Tyr-Met (HSGPYM),ESI-MS测定分子量为690.8 Da。
2.一种金枪鱼鱼鳔降血脂和抗氧化寡肽的制备方法,其特征在于所述制备方法包括以下步骤:以金枪鱼鱼鳔为原料,后经酶解、超滤、凝胶色谱纯化、RP-HPLC纯化制备得到金枪鱼鱼鳔降血脂和抗氧化寡肽;具体包括以下步骤:
1)金枪鱼鱼鳔的预处理:将金枪鱼鱼鳔解冻、除杂、组织捣碎机中匀浆至糊状,
加入到0.05 mol/L的NaOH溶液于4℃下浸泡18~24 h,过滤,用蒸馏水将NaOH冲洗干净,干燥, 加入乙酸乙酯,于室温42 KHZ、300 W超声处理25 ~ 30 min,离心除去上清液,得预处理的金枪鱼鱼鳔粉末;
2)金枪鱼鱼鳔的酶解:取上述预处理金枪鱼鱼鳔粉末,加入蒸馏水,调温至35~
40℃,调节pH值至1.0~2.0,加入胃蛋白酶,水解4~5 h,于95℃、10 min灭酶活;样品降温50~55℃时,调节pH值至9.5~10.5,加入碱性蛋白酶,反应4~5 h,于95℃、10 min灭酶,冷却至常温,9000 rpm离心18~20 min,收集上清液,即金枪鱼鱼鳔酶解液;
3)金枪鱼鱼鳔降血脂寡肽的制备:将金枪鱼鱼鳔酶解液经截留分子量为1 kDa、5 kDa和10kDa的超滤膜进行分级,收集分级组分,检测各组分对HepG2细胞模型中脂质堆积和活性氧自由基(ROS)含量的影响效果,降脂和清除ROS效果最佳超滤组分依次经羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化,得到金枪鱼鱼鳔降血脂寡肽,其中,所述步骤1)中金枪鱼鱼鳔与0.05 mol/L的NaOH溶液的重量体积比为1 g:18~20 mL;步骤1)中金枪鱼鱼鳔与乙酸乙酯的重量体积比为1g:12~15 mL;所述步骤2)中预处理金枪鱼鱼鳔粉末与蒸馏水的重量体积比为1g:8~10mL;所述步骤2)中胃蛋白酶的添加量为鱼鳔粉末重量1.5~1.8%;所述碱性蛋白酶的添加量为鱼鳔粉末重量0.8~1.0%;步骤3)中的羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析步骤为:将上述降脂效果最佳超滤组分溶于双蒸水配成浓度为35~45 mg/mL的溶液,经过羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析分离,所述羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析的规格为2.6×120 cm,用双蒸水进行洗脱,流速0.6~0.9 mL/min,根据220 nm下的凝胶层析色谱图,收集各色谱峰组分,测定各色谱峰组分对HepG2细胞模型中脂质堆积和ROS含量的影响效果,选择降低脂质堆积和清除ROS效果最好的色谱峰组分,冻干,得金枪鱼鱼鳔降血脂凝胶层析酶解物;步骤3)中RP-HPLC纯化步骤为:将上述金枪鱼鱼鳔降血脂凝胶层析酶解物用双蒸水配成100~120 μg/mL的溶液,利用RP-HPLC进行纯化,根据制备多肽的降血脂和清除ROS能力得1个高活性寡肽His-Ser-Gly-Pro-Tyr-Met (HSGPYM),ESI-MS测定分子量为690.8 Da;所述步骤3)中RP-HPLC纯化条件为:进样量180~200 μL;色谱柱Hypersil 300A C18:250 mm×10.0 mm,10 μm;流动相:55%乙腈;洗脱速度1.5~2.0 mL/min;紫外检测波长220 nm。