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专利号: 2021106403311
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种式(Ⅰ)所示氧杂蒽酮类化合物的制备方法,其特征在于所述方法包括如下步骤:

(1)发酵培养:曲霉菌(Aspergillus sp.)WHUF03110接种至大米培养基中,室温静置发酵27‑30天,得到发酵物;所述大米培养基是将大米与水以质量比1:1‑10混合而成;所述曲霉菌WHUF03110保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期2021年5月11日,保藏编号CCTCC NO:M2021515,地址中国武汉,武汉大学,邮编430072;

(2)粗提物:将发酵物搅拌分散,加入等体积乙酸乙酯超声萃取,得到有机相,有机相减压浓缩至无液体流出,得到粗提物;

(3)分离提取:

a、粗提物采用正相硅胶柱色谱分离,依次用体积比10:1、4:1、1:1石油醚‑乙酸乙酯,体积比10:1二氯甲烷‑甲醇,纯甲醇作为洗脱剂进行洗脱,洗脱速度均为10‑30mL/min,洗脱体积均为2‑6个柱体积,每瓶接500mL流出液,以体积比9:1的二氯甲烷‑甲醇为展开剂,经薄层层析点板监测,合并Rf为0.7‑1.0的流出液,记为组分A;合并Rf为0.6‑0.7的流出液,记为组分B;合并Rf为0.5‑0.6的流出液,记为组分C;合并Rf为0.4‑0.5的流出液,记为组分D;合并Rf为0.3‑0.4的流出液,记为组分E;合并Rf为0.2‑0.3的流出液,记为组分F;合并Rf为0.1‑

0.2的流出液,记为组分G;合并Rf为0‑0.1的流出液,记为组分H;

b、组分D再进行正相硅胶柱色谱分离,依次用体积比15:1、8:1、2:1、0:1的石油醚‑乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱,洗脱速度均为10‑30mL/min,洗脱体积均为2‑6个柱体积,每瓶接

500mL流出液,以体积比9:1的二氯甲烷‑甲醇为展开剂,经薄层层析点板监测,合并Rf为

0.7‑1.0的流出液,记为组分D1;合并Rf为0.6‑0.7的流出液,记为组分D2;合并Rf为0.5‑0.6的流出液,记为组分D3;合并Rf为0.4‑0.5的流出液,记为组分D4;合并Rf为0.3‑0.4的流出液,记为组分D5;合并Rf为0.2‑0.3的流出液,记为组分D6;合并Rf为0.1‑0.2的流出液,记为组分D7;合并Rf为0‑0.1的流出液,记为组分D8;

c、组分D2经正相硅胶柱色谱分离,依次用体积比15:1、12:1、8:1、0:1石油醚‑乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱,洗脱速度均为5‑15mL/min,洗脱体积均为2‑6个柱体积,每瓶接500mL流出液,以体积比9:1的二氯甲烷‑甲醇为展开剂,经薄层层析点板监测,合并Rf为0.6‑1.0的流出液,记为组分D2‑A;合并Rf为0.5‑0.6的流出液,记为组分D2‑B;合并Rf为0.4‑0.5的流出液,记为组分D2‑C;合并Rf为0.3‑0.4的流出液,记为组分D2‑D;合并Rf为0.2‑0.3的流出液,记为组分D2‑E;合并Rf为0‑0.2的流出液,记为组分D2‑F;

d、D2‑C经正相硅胶柱色谱分离,依次用体积比9:1、8:1石油醚‑乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱,洗脱速度均为5‑15mL/min,洗脱体积均为2‑6个柱体积,每瓶接100mL流出液,以体积比9:1的二氯甲烷‑甲醇为展开剂,经薄层层析点板监测,合并Rf为0.8‑1.0的流出液,记为组分D2‑C1;合并Rf为0.6‑0.8的流出液,记为组分D2‑C2;合并Rf为0.4‑0.6的流出液,记为组分D2‑C3;合并Rf为0.2‑0.4的流出液,记为组分D2‑C4;合并Rf为0‑0.2的流出液,记为组分D2‑C5;

e、步骤d收集的D2‑C1组分再经半制备型高效液相色谱分离,以体积比65:35的甲醇‑水等度洗脱,收集18min处的馏分,浓缩蒸干,得到式(I)所示氧杂蒽酮类化合物;

2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤(1)中曲霉菌WHUF03110发酵前先进行活化和种子扩大培养,再将种子液以体积浓度5%的接种量接种至大米培养基中,所述活化和种子扩大培养为:将曲霉菌WHUF03110接种到平板培养基中,于28℃培养箱培养3‑5d,至菌落长至成熟;取孢子接种于ISP4液体培养基中,于28‑30℃、180‑220rpm摇床振荡培养

3‑5d,作为种子液;平板培养基终浓度组成为土豆200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂15~20g/L、溶剂为水,自然pH;ISP4液体培养基终浓度组成为:可溶性淀粉15g/L、葡萄糖5g/L、蛋白胨5g/L、酵母粉5g/L、(NH4)2SO4 0.5g/L、K2HPO4 0.5g/L、NaCl 0.5g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、CaCO3 

1g/L,溶剂为水,pH 7.2。

3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤(2)中所述超声萃取条件为70KHz频率常温15min,提取次数为1‑3次。

4.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤(3)的a到d中,硅胶柱色谱的硅胶均

200~300目,柱高均为30cm,内径均为3cm。

5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于步骤(3)的e中半制备型高效液相色谱条件为:色谱柱型号Agilent ZORBAX SB‑C18,5μm,9.6×150mm,高效液相色谱系统为Agilent 

1260,检测波长为220nm、254nm,进样量为50μL。