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专利号: 2021100898359
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-11-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种提高酿酒酵母工程菌脂肪酸乙酯产量的方法,其特征在于,包括如下步骤:在酿酒酵母宿主中,阻断甾醇酯途径、三酰基甘油途径和β氧化途径,并表达了蜡酯合成酶WS2,构建得到产脂肪酸乙酯的酿酒酵母工程菌;

所述的酿酒酵母宿主为尿嘧啶缺陷型菌株BY4741;

在所述的酿酒酵母工程菌发酵培养过程中,发酵30 40h时一次性补加1 3%菜籽油并且~ ~开始按照6 10mL/h的流速流加乙醇;并在发酵罐中葡萄糖浓度低于4 6g/L后,开始补加葡~ ~萄糖,将发酵罐葡萄糖浓度维持在5 10 g/L,进行发酵培养,得到含有脂肪酸乙酯的发酵~液;

在发酵培养过程中,pH维持在5 6,发酵前30 40h转速为180 220rpm,空气流量2 3vvm,~ ~ ~ ~

30 40h后转速为350 450rpm,空气流量4 6vvm;

~ ~ ~

其中,阻断甾醇酯途径是通过敲除甾醇酰基转移酶ARE1和ARE2的编码基因;阻断三酰基甘油途径是通过敲除甘油酰基转移酶DGA1和LRO1的编码基因;阻断β氧化途径是通过敲除长链脂肪酸转运体PXA2的编码基因;

所述的蜡酯合成酶WS2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在发酵培养之前,将所述的酿酒酵母工程菌活化后在种子培养基中培养得到种子液,再将种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的种子培养基为:酵母粉5 15 g/L,蛋~白胨15 25 g/L,葡萄糖15 25 g/L。

~ ~

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的发酵培养基为:葡萄糖50 70 g/L、~YNB 6~7 g/L、酵母粉15~20 g/L、蛋白胨2~4 g/L、K2HPO4 7~8 g/L、KH2PO4 9~10 g/L、醋酸2~

4 g/L。