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专利号: 2020110307825
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于,包括抗原蛋白或抗原蛋白溶液或包被所述抗原蛋白溶液的包被板,所述抗原蛋白为如下a或b或c:a)SEQ ID NO.2序列所示的蛋白质;

b)在SEQ ID NO.2序列所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质;

c)将a)或b)所示蛋白质的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由SEQ ID NO.2序列衍生的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于:所述抗原蛋白溶液的包被浓度如下:100μL/孔、抗原蛋白溶液浓度为10μg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于:还包括酶标抗体、显色液、终止液、阳性血清和阴性血清。

4.根据权利要求3所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于:所述酶标抗体为HRP兔抗鸡IgG,稀释倍数为1∶10000。

5.根据权利要求3所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于:所述阳性血清为通过沙门氏菌攻毒SPF鸡后的血清;阴性血清为SPF鸡血清。

6.根据权利要求3所述的检测沙门氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于:所述显色液为TMB,所述终止液为2mol/L的H2SO4。

7.用于扩增沙门氏菌invA基因的特异性引物,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。

8.沙门氏菌invA重组蛋白的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:

(1)核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示的特异性引物对沙门氏菌基因组DNA进行PCR扩增,扩增产物纯化后,将回收的invAPCR产物克隆于原核表达载体,得到重组质粒;

(2)将重组质粒转入表达宿主菌中,获得阳性重组菌株;

(3)诱导阳性重组菌株表达获得沙门氏菌invA重组蛋白。

9.权利要求1-6任一所述的试剂盒的ELISA检测方法,其特征在于:包括如下步骤:

1)将所述抗原蛋白溶液包被孔板;

2)依次将待测血清、酶标抗体、显色液、终止液加入步骤1)处理后的孔板,反应,用酶标仪检测OD450,得到待测血清的OD450;

3)根据待检血清OD450与阴性血清OD450的比值判定,若该比值大于等于2则判定为阳性,若该比值小于2则判定为阴性。

10.权利要求1-6任一所述试剂盒在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用;

或,权利要求1-6任一所述试剂盒在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用;

或,权利要求1中的所述抗原蛋白在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用;

或,权利要求1中所述抗原蛋白在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用;

或,权利要求1中所述抗原蛋白和权利要求9所述的ELISA检测方法在制备检测待测样本是否感染沙门氏菌产品中的应用;

或,权利要求1中所述抗原蛋白和权利要求9所述的ELISA检测方法在制备检测待测样本是否含有沙门氏菌抗体产品中的应用。