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专利号: 2013106980653
申请人: 广西大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测猪胞内劳森氏菌抗体的ELISA试剂盒,包括包被酶标板、阴性对照血清、阳性对照血清、酶标二抗、浓缩洗涤液、样品稀释液、显色液和终止液,其特征在于:所述包被酶标板以重组蛋白1024b作为包被抗原。

2.根据权利要求1所述的检测猪胞内劳森氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于:所述重组蛋白1024b具有序列表SEQ.ID.No.1的氨基酸序列或由具有序列表SEQ.ID.No.2的碱基序列的基因编码。

3.根据权利要求2所述的检测猪胞内劳森氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于:所述包被酶标板每孔包被重组蛋白1024b50ng,包被缓冲液采用pH9.6的0.05M碳酸盐缓冲液,并用5%的脱脂奶粉作为封闭液进行封闭。

4.根据权利要求3所述的检测猪胞内劳森氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于:所述阴性对照血清和阳性对照血清各2mL;

所述酶标二抗为60mL,由美国Earthox公司生产的山羊抗猪IgG稀释8000倍而得;

所述浓缩洗涤液为10×洗涤液,为含0.5%吐温-20pH7.2-7.4的0.1M的PBS溶液,共

200mL;

所述样品稀释液为含有0.2%牛血清白蛋白和0.01%叠氮钠pH7.2-7.4的0.01M的PBS溶液,共100mL;

所述显色液包括显色液A和显色液B,显色液A:称取200mg四甲基联苯胺,溶于100mL的无水乙醇中,双蒸水定容至1000mL;显色液B:称取柠檬酸21g、无水磷酸钠28.2g,量取

0.75%过氧化氢尿素6.4mL,双蒸水定容至1000mL,调节PH值为4.5-5.0;显色液A和显色液B均为60mL。

所述终止液为2M的H2SO4溶液,共30mL。

5.根据权利要求4所述的检测猪胞内劳森氏菌抗体的ELISA试剂盒,其特征在于所述重组蛋白1024b按以下操作制备:以胞内劳森氏菌阳性猪回肠粘膜DNA为模板,PCR扩增猪胞内劳森氏菌外膜蛋白1024的基因并克隆得到克隆质粒pMD-1024;以克隆质粒pMD-1024为模板,扩增1024b并克隆获得克隆质粒pMD-1024b,再将1024b亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中筛选获得原核表达质粒pET32a-OMP1024b;将原核表达质粒pET32a-OMP1024b转化进宿主表达菌BL-21(DE3)中,经IPTG诱导表达获得重组蛋白

2+

1024b;利用Ni 亲和层析法纯化重组蛋白1024b,复性后得到具有生物学活性的重组蛋白

1024b。