1.一种基于Cu-ZrMOF的多模式信号检测蔬菜中毒死蜱含量的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备Cu-ZrMOF纳米酶材料;
(2)制备磁控免疫探针;
(3)制备Cu-ZrMOF多模式传感探针;
(4)利用Cu-ZrMOF纳米酶结合磁控免疫探针构建检测蔬菜中毒死蜱含量的多模式信号传感平台,具体是利用Cu-ZrMOF纳米酶和G-四链体DNAzyme串联体的协同催化性能以及两种模拟酶催化底物邻苯二胺产生具有电活性、荧光发射性能和显色能力的氧化产物 2,3-二氨基吩嗪,建立毒死蜱多模式信号传感平台;
检测时,先绘制电化学检测、荧光检测和比色检测信号随毒死蜱浓度大小变化的工作曲线,再对蔬菜样品中毒死蜱含量进行检测。
2.根据权利要求1所述的基于Cu-ZrMOF的多模式信号检测蔬菜中毒死蜱含量的方法,其特征在于:步骤(1)所述制备Cu-ZrMOF纳米酶材料,包括如下步骤:(1.1)将2,2'-联吡啶-5,5'-二羧酸分散于二甲基甲酰胺DMF中,超声处理;将ZrCl4溶于DMF中,超声处理;
(1.2)将步骤(1.1)两种溶液混合在反应器中,加入乙酸并超声处理,然后将该溶液在
120℃下搅拌加热16 h,通过离心分离获得白色固体,并用乙醇洗涤三次,得到ZrMOF;
(1.3)在圆底烧瓶中,将ZrMOF溶于四氢呋喃中,经超声处理后,向该溶液加入CuCl2·
2H2O,超声处理,然后搅拌2 h;
(1.4)最后,通过离心收集绿色固体Cu-ZrMOF,并用乙醇洗涤三次,重新分散在DMF中,将溶液储存在4℃下。
3.根据权利要求2所述的基于Cu-ZrMOF的多模式信号检测蔬菜中毒死蜱含量的方法,其特征在于:步骤(1.1)所述2,2'-联吡啶-5,5'-二羧酸和ZrCl4的质量浓度比为6.13:1;
2,2'-联吡啶-5,5'-二羧酸和DMF的质量比为1:71.10;
ZrCl4和DMF的质量比为1:435.53;
步骤(1.2)所述DMF和乙酸溶剂的体积比为12:1;
步骤(1.3)所述ZrMOF和CuCl2·2H2O的质量浓度比为3:1;
ZrMOF和四氢呋喃的质量比为3:500。
4.根据权利要求1所述的基于Cu-ZrMOF的多模式信号检测蔬菜中毒死蜱含量的方法,其特征在于:步骤(2)所述制备磁控免疫探针,是利用羧基磁珠通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS交联作用固定毒死蜱抗体,包括如下步骤:(2.1)将EDC和NHS加入羧基磁珠中震荡30 min,然后用10 mM,pH为7.4的磷酸盐溶液洗涤3 5次;
~
(2.2)洗涤后,加入毒死蜱抗体,在4℃下先震荡再磁性分离,磁性分离后,用10 mM,pH为7.4的磷酸盐溶液(PB)洗涤3 5次,以除去未结合的抗体,并分散在0.5 mL含有1.0wt%~BSA的PB溶液中并在4℃震摇1 h,最后在4℃下储存。
5.根据权利要求4所述的基于Cu-ZrMOF的多模式信号检测蔬菜中毒死蜱含量的方法,其特征在于:所述EDC和NHS的质量浓度比为6.72:1;
所述羧基磁珠和毒死蜱抗体的质量浓度比为357.14:1,体积比为35.71:1。
6.根据权利要求1所述的基于Cu-ZrMOF基于Cu-ZrMOF的多模式信号检测蔬菜中毒死蜱含量的方法,其特征在于:步骤(3)所述制备Cu-ZrMOF多模式传感探针,具体方法是:取步骤(1)制备的Cu-ZrMOF离心分离弃去上清液,并重新悬浮在DMF中;
随后,将含有毒死蜱适体链和引发剂链S0的PB溶液加入Cu-ZrMOF溶液中,并于37℃下震荡过夜;
然后离心分离以除去未结合的毒死蜱适体链和S0并用PB溶液洗涤;
最后,将产物储存在DMF中备用。
7.根据权利要求6所述的基于Cu-ZrMOF基于Cu-ZrMOF的多模式信号检测蔬菜中毒死蜱含量的方法,其特征在于:步骤(3)所述毒死蜱适体链和引发剂链S0物质量浓度比1:1,体积比为1:2。
8.根据权利要求1所述的基于Cu-ZrMOF的多模式信号检测蔬菜中毒死蜱含量的方法,其特征在于:步骤(4)所述利用Cu-ZrMOF纳米酶结合磁控免疫探针构建检测蔬菜中毒死蜱的多模式传感平台,包括如下步骤:离心管中加入磁控免疫探针和不同浓度毒死蜱标准溶液室温震荡孵育30 min,磁性分离后用PB溶液清洗3 5次,再加入制备的Cu-ZrMOF多模式传感探针,室温震荡孵育40 min,~随后加入杂交链S1和S2,37℃下震荡孵育1 h,再加入Hemin,37℃下孵育震荡30 min,接着磁性分离后用PB清洗3 5次,用于电化学、荧光和比色检测;
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电化学检测:将洗涤分离后得到的磁控免疫复合物重新分散在PB中,然后加入H2O2和OPD,在室温孵育15 min,经磁性分离后取上清液,最后利用差分脉冲伏安法(DPV)检测并记录电流响应值,即可绘制毒死蜱浓度与电流响应值之间的标准曲线;
荧光检测:将洗涤分离后得到的磁控免疫复合物重新分散在PB中,然后加入H2O2和OPD,在室温孵育15 min,经磁性分离后取上清液后,在464 nm激发下记录570 nm处的荧光发射强度,使用酶标仪读取荧光信号强度,即可绘制毒死蜱浓度与570 nm处荧光强度之间的标准曲线;
比色检测:将洗涤分离后得到的磁控免疫复合物重新分散在PB中,然后加入H2O2和OPD,在室温孵育15 min,经磁性分离后取上清液后,使用酶标仪读取414 nm处的OD值,即可绘制毒死蜱浓度与414 nm处OD值之间的标准曲线;
根据标准曲线,测定蔬菜中毒死蜱含量。
9.根据权利要求8所述的基于Cu-ZrMOF的多模式信号检测蔬菜中毒死蜱含量的方法,其特征在于:步骤(4)所述磁控免疫探针和毒死蜱标准品与Cu-ZrMOF多模式传感探针的体积为1:1:
1;
电化学检测:H2O2和OPD的物质量浓度比为1:2;
荧光检测和比色检测:H2O2和OPD的物质量浓度比为9:10。