1.一种发酵法生产D‑泛酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)活化培养:将大肠杆菌接种至平板培养基上活化培养,得到活化菌;
(2)种子培养:将步骤(1)得到的活化菌接种至种子培养基中进行培养,得到种子液;
(3)发酵培养:按照发酵培养基体积的15%的接种量,取步骤(2)得到的种子液,接种至发酵培养基中发酵培养生产D‑泛酸,初始搅拌转速400rpm/min;维持溶氧值为15%;每2小时调整一次葡萄糖进料速率,控制残余葡萄糖浓度为1g/L;在开始补料葡萄糖后,同时往发酵罐中以10mL/h的喂入速度开始喂入40g/L异亮氨酸溶液;
步骤(1)中所述大肠杆菌为将大肠杆菌serA基因与panB基因、panC基因分别克隆到质粒pTrc99A中获得重组质粒后,将重组质粒转染到保藏号为CCTCC NO:M2018914的大肠杆菌中进行过表达所得,其中,panB基因序列如SEQ ID NO.1所示,panC基因序列如SEQ ID NO.2所示,serA基因序列如SEQ ID NO.3所示;
步骤(3)中发酵培养基为:葡萄糖56g/L,硫酸铵11.8g/L,酵母提取物2g/L,磷酸二氢钾
0.8g/L,硫酸镁0.5g/L,β‑丙氨酸1.5g/L,碳酸钙10g/L,VB12 0.001g/L,VB1 0.001g/L,盐溶液1ml/L,丝氨酸100mg/L,异丙基硫代半乳糖苷0.1mmol/L;
所述盐溶液为:CuCl2 10g/L,FeSO4·7H2O 10g/L,ZnSO4·7H2O 1g/L,CuSO4 0.20g/L,NiCl2·7H2O 0.02g/L。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述平板培养基为:蛋白胨10g/L、酵母膏
10g/L、NaCl 5g/L、琼脂粉20g/L,pH=6.8‑7.0。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述种子培养基为:蛋白胨10g/L、酵母膏
10g/L、NaCl 5g/L,pH=6.8‑7.0。