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专利号: 202011014094X
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种发酵生产D‑泛酸的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)活化培养:将保藏号为CCTCC NO:M2018914的大肠杆菌接种到平板培养基上活化培养,得到活化菌;

(2)种子培养:将步骤(1)得到的活化菌接种于种子培养基中进行种子培养,得到种子液;

(3)将种子液接种到发酵培养基中发酵培养生产D‑泛酸,发酵时搅拌转速400‑700r/min;通过搅拌和通风控制溶氧在10‑25%;通过流加氨水控制pH在6.5‑7.0;培养温度25.0~32.0℃;发酵前期,时间为0‑13h,不控制葡萄糖浓度;发酵中期,时间为13‑29h,往发酵罐中流加补料培养基,控制葡萄糖浓度为0.8‑1.2g/L;发酵后期,时间为29h以后,控制葡萄糖浓度为4.5‑5.5g/L;开始流加补料培养基后,同时往发酵罐中流加异亮氨酸水溶液,所述异亮氨酸水溶液的浓度为35‑55g/L,直至发酵结束添加的异亮氨酸的总量为34‑45g;流加后发酵液中异亮氨酸浓度为0.015‑0.025g/L;

步骤(3)中发酵培养基为:葡萄糖18‑22g/L,硫酸铵12‑16g/L,酵母提取物1.5‑2.5g/L,磷酸二氢钾0.6‑0.8g/L,硫酸镁0.4‑0.6g/L,β‑丙氨酸1.2‑2g/L,碳酸钙8‑12g/L,VB12 

0.001g/L,VB1 0.001g/L,盐溶液1mL/L,丝氨酸100‑150mg/L,异丙基硫代半乳糖苷

0.1mmol/L;

步骤(3)中补料培养基为:葡萄糖500g/L,硫酸镁8g/L,磷酸二氢钾14g/L,β‑丙氨酸

40g/L,硫酸铵10g/L,VB12 0.002g/L,VB1 0.005g/L,Ile 0.08g/L,丝氨酸100mg/L,盐溶液

2mL,IPTG 1mmol/L;

所述盐溶液为:CuCl2 10g/L、FeSO4·7H2O 10g/L、ZnSO4·7H2O 1g/L、CuSO4 0.20g/L、NiCl2·7H2O 0.02g/L。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中平板培养基为:蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl 5g/L、琼脂粉20g/L,pH=6.8‑7.0。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中种子培养基为:蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl 5g/L,pH=6.8‑7.0。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中种子液接种量为发酵培养基体积的6‑15%。

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤(3)中种子液接种量为发酵培养基体积的8‑12%;溶氧控制在在14‑18%;通过流加氨水控制pH在6.8‑7.0;培养温度控制在29.0~

31.0℃。