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专利号: 2020105546722
申请人: 电子科技大学中山学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种鉴定玛咖的方法,其特征在于采用区序列rbcL,区序列rbcL核苷酸序列记为SEQ ID No:1,对待测样品进行鉴定,包括如下步骤:步骤1:待测样品预处理,提取待测样品的DNA,得到待测样品DNA;

步骤2:rbcL区序列的上、下游引物分别为引物F、引物R,使用rbcL区序列的引物F和引物R分别进行PCR扩增反应,得到待测样品rbcL区序列,所述引物F的核苷酸序列记为SEQ ID No:2,所述引物R的核苷酸序列记为SEQ ID No:3;

步骤3:将步骤2得到的待测样品rbcL区序列进行比对匹配,如果自序列SEQ ID No:1的

5’端起第221位碱基为G、第240碱基为A、第375位碱基为G、第381位碱基为G、第432位碱基为C、第465位碱基为A、第471位碱基为T、第492位碱基为A、则鉴定为玛咖,否则鉴定为不是玛咖。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定玛咖的方法,其特征在于待测样品先经过预处理后才进行待测样品的DNA提取,得到待测样品DNA,所述预处理是将待测样品浸泡于质量百分比浓度为75%的乙醇溶液中5 min,之后放置于无菌环境中风干,然后在液氮冷却的条件下研磨至细粉末状,该细粉末状物质即为待测样品。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定玛咖的方法,其特征在于所述PCR扩增的反应体系总体积为20μL,该反应体系包含2.5 mmol/L MgCl2的10×PCR Buffer 2 μL、四种2.5 mmol/L单核苷酸1.6 μL、10 μmol/L rbcL引物F 0.8 μL、10 μmol/L rbcL引物R 0.8 μL,5U/μL HiFi DNA聚合酶0.1 μL和模板DNA 50 ng,余量为无菌超纯水;所述四种2.5 mmol/L单核苷酸为腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶。

4.根据权利要求1所述的一种鉴定玛咖的方法,其特征在于所述PCR扩增反应过程依次为:95℃预变性4 min,92℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环,72℃延伸

10 min。

5.根据权利要求1所述的一种鉴定玛咖的方法,其特征在于将步骤3中待测样品rbcL区序列,再导入软件MEGA,并进行比对。

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