1.一种提高胞内普鲁兰酶提取效率的方法，其特征在于步骤如下：

（1）对重组巴斯德毕赤酵母突变体GS115/pPICK-BdP5 WB138进行发酵，在发酵终点以

5000r/min离心2min收集细胞，所获细胞用水悬浮，悬浮液体积控制为原发酵液体积的0.8倍；

（2）在步骤（1）细胞悬液中加入原发酵液1/10体积的10×试剂D，混合后在45℃下反应

15min；随后将细胞悬液放入冰水混合物中使悬液迅速冷却，维持10min，再在4℃放置3h；

（3）在步骤（2）所得反应液中继续加入步骤（1）所得原发酵液1/10体积的10×试剂E，混合，随后在60℃反应20min；

（4）以5000r/min离心2min收集细胞；用20mmol/L、pH5.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液悬浮细胞，控制体积与原发酵液相同；在250 W、1s间隔1s条件下进行超声波破碎，20mL上述细胞悬液完全破碎时间不超过6 min。

2.根据权利要求1所述提高胞内普鲁兰酶提取效率的方法，其特征在于步骤（2）所述10×试剂D的配方如下：12.5mM Tris-HCl，碱性蛋白酶 50U/mL，菠萝蛋白酶 50U/mL，FeSO4 

2mmol/L，甘油20g/L，乙醇20g/L，pH 7.4-7.6。

3.根据权利要求2所述提高胞内普鲁兰酶提取效率的方法，其特征在于步骤（2）所述10×试剂D的配置方法如下：在1L容器中加入800mL去离子水，加入1.51g Tris三羟甲基氨基甲烷，0.1mol/L的盐酸溶液50mL，混合；再加入FeSO4·H2O 0.56 g，甘油20g，乙醇20g，混合，加入碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶各50000 U，搅拌混合后加水至1 L；最后采用pH调节剂调节pH为7.4-7.6。

4.根据权利要求3所述提高胞内普鲁兰酶提取效率的方法，其特征在于：所述pH调节剂具体为HCl或NaOH溶液。

5.根据权利要求1所述提高胞内普鲁兰酶提取效率的方法，其特征在于步骤（3）所述10×试剂E具体为： 200mM柠檬酸-柠檬酸钠，80mmol/L Na2SO4，70mmol/L KCl，10mmol/L Na2SO3，5mmol/L KH2PO4，pH3.4-3.6。

6.根据权利要求5所述提高胞内普鲁兰酶提取效率的方法，其特征在于步骤（3）所述10×试剂E的配置方法如下：在1L容器中加入800mL去离子水，加入一水合柠檬酸33.6g，二水合柠檬酸三钠11.8g，混合溶解；再加入无水硫酸钠11.4g，氯化钾5.2g，七水合亚硫酸钠

2.5g，磷酸二氢钾0.7g，搅拌溶解；最后采用pH调节剂调节pH为3.4-3.6。

7.根据权利要求6所述提高胞内普鲁兰酶提取效率的方法，其特征在于：所述pH调节剂具体为柠檬酸或柠檬酸钠。