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专利号: 2016111662298
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组表达普鲁兰酶的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,是以枯草芽孢杆菌WB800为宿主,以枯草芽孢杆菌168来源的启动子ylb(F4)替换掉pP43NMK上的启动子P43得到的载体作为表达载体,表达Anoxybacillus sp.WB42来源的普鲁兰酶基因。

2.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌,其特征在于,所述重组表达普鲁兰酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法包括以下步骤:(1)将Anoxybacillus sp.WB42来源的普鲁兰酶基因pulA和质粒pP43NMK同时用限制性内切酶KpnI和HindIII双酶切,纯化回收后的载体pP43NMK与目的基因pulA,进行连接得到pP43NMK-pulA;

(2)以枯草芽孢杆菌168来源的启动子ylb(F4)替换掉pP43NMK-pulA上的启动子P43,得到pPylbNMK-pulA;

(3)将重组质粒pPylbNMK-pulA转入枯草芽孢杆菌WB800菌株,得到重组表达普鲁兰酶的重组枯草芽孢杆菌。

3.一种应用权利要求1或2所述重组枯草芽孢杆菌分泌表达普鲁兰酶的方法,其特征在于,是将重组枯草芽孢杆菌的种子液接种至LB液体培养基中,在35~37℃、180~200rpm培养,当菌体将要进入生长稳定期时,加入终浓度为0.4~0.6%的甜菜碱或0.2~0.4%的吐温-80或0.2~0.5%的司盘80。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,将重组枯草芽孢杆菌的种子液按接种量

1%接种至LB液体培养基中,在37℃,200rpm培养,当菌体将要进入生长稳定期时,加入终浓度为0.4%的甜菜碱或0.2%的吐温-80或0.4%的司盘80。

5.权利要求1或2所述重组枯草芽孢杆菌在生产低分子糖浆中的应用。

6.权利要求1或2所述重组枯草芽孢杆菌在生产啤酒中的应用。

7.权利要求1或2所述重组枯草芽孢杆菌在生产酒精燃料中的应用。

8.权利要求1或2所述重组枯草芽孢杆菌在生产抗性淀粉中的应用。