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专利号: 2020102735760
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种(R)-ω-转氨酶突变体,其特征在于,该突变体为下列之一:

(1)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸,第79位精氨酸突变为丙氨酸,第51位的谷氨酰胺突变为苏氨酸、组氨酸或丝氨酸;

(2)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸,第79位精氨酸突变为丙氨酸,第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸,第149位的缬氨酸突变为丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸或甘氨酸;

(3)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸,第79位精氨酸突变为丙氨酸,第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸,第149位的缬氨酸突变为天冬氨酸,第

235位亮氨酸突变为赖氨酸或谷氨酸;

(4)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸,第79位精氨酸突变为丙氨酸,第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸,第149位的缬氨酸突变为天冬氨酸,第

235位亮氨酸突变为谷氨酸,第216位甘氨酸突变为丙氨酸、苯丙氨酸或色氨酸;

(5)由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸,第79位精氨酸突变为丙氨酸,第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸,第149位的缬氨酸突变为天冬氨酸,第

235位亮氨酸突变为谷氨酸,第216位甘氨酸突变为丙氨酸。

2.如权利要求1所述的(R)-ω-转氨酶突变体,其特征在于,由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸突变为甲硫氨酸,第79位精氨酸突变为丙氨酸,第51位的谷氨酰胺突变为丝氨酸,第149位的缬氨酸突变为天冬氨酸,第235位亮氨酸突变为谷氨酸,第216位甘氨酸突变为丙氨酸。

3.一种如权利要求1所述(R)-ω-转氨酶突变体的编码基因。

4.一种包含权利要求1所述编码基因的重组载体。

5.一种包含权利要求1所述编码基因的基因工程菌。

6.如权利要求1所述(R)-ω-转氨酶突变体在生物催化前体酮类似物1-(3-氧吡咯烷-

1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮合成西他列汀中间体(R)-1-[3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基]吡咯-3-酮中的应用。

7.如权利要求5所述基因工程菌在生物催化前体酮类似物1-(3-氧吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮合成西他列汀中间体(R)-1-[3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基]吡咯-3-酮中的应用。

8.一种催化前体酮类似物1-(3-氧吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮合成西他列汀中间体(R)-1-[3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基]吡咯-3-酮的方法,其特征在于,包括:以前体酮类似物1-(3-氧吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮为底物,权利要求1所述(R)-ω-转氨酶突变体或权利要求4所述基因工程菌为生物催化剂,异丙胺为氨基供体,磷酸吡哆醛为辅酶,在缓冲溶液中进行生物催化合成反应,得到西他列汀中间体(R)-1-[3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基]吡咯-3-酮。

9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述生物催化合成反应为35~50℃;缓冲溶液为三乙醇胺-HCl缓冲液,pH为8~9。

10.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述底物的浓度为600~900mM。