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专利号: 2020100423092
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 一般的物理或化学的方法或装置
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种亲和吸附剂,其特征在于,以酵母絮凝蛋白N-Lg-Flo1p为配基,与琼脂糖凝胶结合制备而成。

2.根据权利要求1所述的亲和吸附剂,其特征在于,所述琼脂糖凝胶为Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF或CNBr活化的琼脂糖凝胶4B。

3.根据权利要求1或2所述的亲和吸附剂,其特征在于,所述酵母絮凝蛋白N-Lg-Flo1p携带6×组氨酸标签。

4.根据权利要求1或2所述的亲和吸附剂,其特征在于,所述酵母絮凝蛋白N-Lg-Flo1p通过微生物表达;编码所述酵母絮凝蛋白N-Lg-Flo1p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.一种制备权利要求1~4任一所述亲和吸附剂的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将含有Lg-Flo1p的N端基因序列的重组质粒在大肠杆菌中进行表达,获得外源包涵体N-Lg-Flo1p,并对其进行变性溶解及复性;

(2)吸取Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF 1mL装柱子,用含有20mM Tris-HCl和0.2mM NaCl的平衡缓冲液平衡10个柱体积;

(3)将步骤(1)制备的N-Lg-Flo1p复性液加入到吸附柱中纯化,用5倍柱体积的平衡缓冲液洗柱,收集洗涤液,直到没有蛋白流出,制得亲和吸附剂。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤(1)中所述含有Lg-Flo1p的N端基因序列如SEQ ID NO.1所示。

7.权利要求1~4任一所述亲和吸附剂在吸附甘露低聚糖中的应用。

8.一种吸附甘露低聚糖的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)将结合了N-Lg-Flo1p的Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF,加入到含有甘露低聚糖的溶液中,在转速为80~100r/min振荡0.5~1.5h;

(2)将吸附剂装柱,用含有0.2M NaCl、pH4.5的20mM Tris-HCl缓冲液洗脱,收集甘露低聚糖。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述含有甘露低聚糖的溶液中甘露低聚糖含量为20~100mg。

10.权利要求1~4任一所述的亲和吸附剂在制备食品或饲料添加剂中的应用。