1.一种牛骨中胶原蛋白的提取方法,其特征在于,包括如下步骤:S1破碎:将新鲜牛骨洗净后破碎至过50‑80目筛,得牛骨粉;
S2速冻:将牛骨粉在零下10℃至零下30℃的条件下进行冷冻1‑3h;
S3解冻:将牛骨粉置于容器中,用含酒石酸的水蒸汽喷淋10‑15min;所述含酒石酸的水蒸汽中酒石酸质量分数为30‑40%;所述每100g牛骨粉的喷淋速率为500‑700mL/s;
S4脱脂脱钙:将牛骨粉按料液比1:(2‑5)的质量比置于复合酶液中,在20‑35℃、100‑
200转/min的条件下摇床发酵培养5‑10h,再将牛骨粉按料液比1:(1.8‑3.6)的质量比置于鼠李糖乳杆菌液中,在相同条件下摇床发酵培养5‑10h,过滤,取固形物为牛骨粉;
S5变频电解:将牛骨粉按料液比1:(1.5‑2.5)的质量比置于质量分数40‑60%的氨基酸
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溶液,在电流密度为15‑25A/cm 的条件下变频电解20‑25min,静置后,按添加量为4‑7mg/L加入改性壳聚糖,在30‑40℃的条件下搅拌10‑20min,然后置于转速为4000‑6000r/min的离心机中离心8‑15min,取上清液浓缩3‑5倍,冷冻干燥即得胶原蛋白;
所述复合酶液中酶的总活力为4000‑5000U/mL,复合酶由脂肪酶与磷脂酶接种量比为(3‑7):1;
所述氨基酸为异亮氨酸与丝氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、精氨酸中任一种按1:(0.2‑0.5)的质量比组成。
2.如权利要求1所述牛骨中胶原蛋白的提取方法,其特征在于,所述复合酶液是将复合酶接种于改性米糠多糖溶液中搅拌10‑15min。
3.如权利要求2所述牛骨中胶原蛋白的提取方法,其特征在于,所述改性米糠多糖是将米糠多糖加入水中配成质量浓度为8‑12%的米糠多糖溶液,在温度为35‑45℃、转速为200‑
500r/min搅拌下向米糠多糖溶液中同时滴加质量分数为15‑25%的柠檬酸和质量分数为
30‑40%的茶多酚溶液,所述柠檬酸的滴加量为米糠多糖溶液重量的0.8‑1.6%,所述茶多酚的滴加量为米糠多糖溶液重量的0.3‑0.7‰,滴加完毕后继续以转速为200‑500r/min搅拌反应30‑40min。
4.如权利要求1所述牛骨中胶原蛋白的提取方法,其特征在于,所述鼠李糖乳杆菌液是将鼠李糖乳杆菌冻干菌粉采用MRS液体培养基在30‑35℃条件下活化1‑4h后,得悬浮液;将悬浮液在45‑55℃下热胁迫处理10‑25min;所述鼠李糖乳杆菌活化液总活菌数为(1.7‑3.7)7
×10 cfu/mL。
5.如权利要求4所述牛骨中胶原蛋白的提取方法,其特征在于,所述MRS液体培养基配方为:蛋白胨6‑8g,枯草芽孢杆菌提取物2‑4g,葡萄糖22‑27g,乙酸钠1‑3g,柠檬酸二铵3‑
4g,吐温80 1‑2mL,MgSO4·7H2O0.1‑0.3g,MnSO4·4H2O0.03‑0.04g,K2HPO4 2‑4g,琼脂粉12‑
16g,水1100‑1300mL。
6.如权利要求5所述牛骨中胶原蛋白的提取方法,其特征在于,所述枯草芽孢杆菌提取物的制备方法为:
(1)将枯草芽孢杆菌菌丝体与温度为75‑84℃的热水按1:(2‑5)的质量比混合搅拌20‑
25min;
(2)将步骤(1)所得物降温至25‑35℃,并将pH值调节到6.5‑7.0,然后按加酶量0.03‑
0.07‰的量加入蛋白酶和按加酶量0.05‑0.08‰的量加入纤维素酶,进行水解反应8‑12h;
(3)将步骤(2)得到的水解液加热至75‑85℃,灭活0.5‑2h,然后分离,分离后的液体经浓缩或喷雾干燥后即得所述枯草芽孢杆菌提取物。
7.如权利要求1所述牛骨中胶原蛋白的提取方法,其特征在于,所述改性壳聚糖的制备方法为:将壳聚糖和氧化铁在温度为40‑50℃条件下搅拌10‑20min,得改性壳聚糖。