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专利号: 2019103619069
申请人: 山东理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器的制备方法,其特征在于,步骤如下:(1)将直径4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨成镜面,超纯水清洗干净;

(2)将6 µL、1   3 mg/mL的Au NPs溶液滴涂于上述电极表面,室温下晾干,超纯水洗电~极表面,晾干;

(3)继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面,超纯水冲洗,4 ℃冰箱干燥;

(4)继续将3 µL、0.5   1.5 mg/mL、质量分数为1 %的牛血清蛋白溶液滴加到电极表~面,用以封装电极表面的非特异性活性位点,超纯水冲洗电极表面,除去未结合的BSA,4 ℃冰箱晾干;

(5)继续滴加6 µL、10 fg/mL   100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液,~超纯水冲洗电极表面,4 ℃冰箱晾干;

(6)继续滴加6 µL、1.5   3.5 mg/mL的检测抗体孵化物Pt@MOF-GO-Ab2溶液于电极表~面,置于4 ℃冰箱中孵化40 min,超纯水冲洗、晾干,制得一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器。

2.如权利要求1所述的一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器的制备方法,所述Au NPs溶液的制备,其特征在于,步骤如下:将0.4 ~0.8 mmol的HAuCl4加入10 mL水中,搅拌下加热到90 ℃,逐滴加入柠檬酸钠20  40 mmol,溶液在3 min内由黄色逐渐变为蓝色,20 min后变为酒红色,制得分散均匀的Au ~NPs溶液。

3.如权利要求1所述的一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器的制备方法,所述检测抗体孵化物Pt@MOF-GO-Ab2溶液的制备,其特征在于,步骤如下:(1)GO的制备

将40   60 mL、浓度为98 %的浓硫酸加入到500 mL烧杯中,将烧杯置于0 ℃冰浴中并~搅拌,缓慢加入1 g石墨粉,搅拌均匀后,加入0.3   0.7 g硝酸钠,继续缓慢加入5   8 g高~ ~锰酸钾,在0 ℃冰水浴下搅拌60   120 min后,移入50 ℃水浴,搅拌90   150 min后,将水~ ~浴温度升至55 ℃,搅拌2   3 h,逐滴加入25   50 mL超纯水后,继续缓慢加入100 mL的超~ ~纯水,搅拌10   20 min,然后匀速加入5   10 mL、30 %过氧化氢,搅拌10   15 min,在室~ ~ ~温下静置12 h,下层沉淀离心,超纯水洗涤后,将沉淀物移入透析袋并密封,置于500 mL烧杯中,加入400 mL超纯水透析4   5天后,取1 g沉淀物,加入100   200 mL超纯水,超声20 ~ ~ 30 min,在3000 rpm下离心5   10 min,将得到的上清液继续以4500 rpm离心2   5 ~ ~ ~min,取上清液置于50 mL培养皿中,在-20 ℃冰箱中冷冻12 h后,放入冷冻干燥机中,-80 ℃下冷冻干燥后,得到GO;

(2)MOF-GO的制备

称取均苯三酸0.05   0.15 g,硝酸铜0.15   0.3 g,加入到盛有35 mL DMF的烧杯中,~ ~加入0.05   0.2 mL的三乙胺,超声5 min分散均匀,然后加入20   40 mg上述制备的GO,超~ ~声15 min分散均匀,移入容量为50 mL的聚四氟乙烯的高压釜内,70 ℃反应20  24 h,冷却~至室温,用DMF离心清洗三次,将洗涤后的固体浸泡在35 mL的二氯甲烷中,每24 h换一次新鲜的二氯甲烷,需更换三次,离心分离后,置于60 ℃真空干燥箱中干燥10   14 h,制得~MOF-GO,置于真空袋中备用;

(3)Pt@MOF-GO的制备

取0.05   0.1 g的MOF-GO,在20 mL DMF溶液中超声分散20 min,然后加入5   15 mL、~ ~

2 mg/mL的H2PtCl6溶液,搅拌3 h后离心分离,室温干燥得到固体粉末,将粉末重新分散在40 mL的乙二醇中,超声分散10 min,加入40 mg/mL的NaOH调节pH至12   13,120 ℃下搅拌反~应4 h,离心分离,在60 ℃的真空干燥箱中干燥10   14 h,制得Pt@MOF-GO;

~

(4)检测抗体孵化物Pt@MOF-GO-Ab2溶液的制备将1   3 mL、2 mg/mL的Pt@MOF-GO分散液加入到0.5   1.5 mL,10 μg/mL的肿瘤标记~ ~物检测抗体Ab2中,4 ℃恒温震荡箱中震荡孵化12 h,离心分离;重新分散至1   3 mL的pH~为7.38的磷酸缓冲液中,制得检测抗体孵化物Pt@MOF-GO-Ab2溶液。

4.如权利要求1所述制备方法制备的一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器,用于肿瘤标志物的检测,步骤如下:(1)使用电化学工作站以三电极体系进行测试,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极,所制备的传感器为工作电极,在10 mL、含10 mmol/L铁氰化钾溶液中进行测试;

(2)用计时电流法对肿瘤标志物进行检测,选择-0.4 V作为电流测量的检测,输入电压为-0.4 V,取样间隔0.1 s,运行时间300 s;

(3)当背景电流趋于稳定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH为7.38的磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液,记录电流变化。

5.如权利要求1、2、3、4所述的肿瘤标志物,其特征在于,所述肿瘤标志物选自下列之一:AFP、PSA。