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专利号: 2019103464208
申请人: 临沂大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA三螺旋水凝胶的制备方法,其特征在于:首先设计直链DNA转录模板,通过滚环转录的方式形成纯RNA体系的水凝胶,直链DNA中设计了CXCR4序列的反义序列及后面可以搭载两种治疗基因的三螺旋反义序列,在转录复制过程中产生治疗型基因CXCR4,然后将另外两种治疗型microRNA及靶向MDA-MB-231细胞的核酸适体通过Waston-Crick和Hoogsteen碱基互补配对原则杂交,离心形成RNA三螺旋水凝胶纳米结构。

2.根据权利要求1所述的用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA三螺旋水凝胶的制备方法,其特征在于:所述直链DNA转录模板的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示,且5’端磷酸化。

3.根据权利要求1所述的用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA三螺旋水凝胶的制备方法,其特征在于:所述另外两种治疗型microRNA为肿瘤抑制的microRNA和oncomiR抑制剂。

4.根据权利要求1所述的用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA三螺旋水凝胶的制备方法,其特征在于:所述另外两种治疗型microRNA核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示,且它们的5’端具有FAM基团。

5.根据权利要求1所述的用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA三螺旋水凝胶的制备方法,其特征在于:靶向MDA-MB-231细胞的核酸适体为Fam-LXLapt-DNA-Chol,其为SEQ ID No.4所示的核苷酸序列且5’端修饰有Fam基团、3’端修饰有胆固醇。

6.根据权利要求1-5任一项所述的用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA三螺旋水凝胶的制备方法,其特征在于:具体步骤如下:(1)取SEQ ID No.1所示且5’端磷酸化的直链DNA模板与T7启动子以相同浓度进行退火处理;

(2)加入T4连接酶及T4连接酶缓冲液,16℃维持12h,形成RNA转录模板;

(3)加入T7聚合酶,rNTP,T7聚合酶缓冲液及TEM缓冲液在37℃下维持4h,形成多副本的RNA水凝胶载体;

(4)将步骤(3)得到的RNA水凝胶载体、TEM缓冲液、两条治疗型microRNA、及靶向MDA-MB-231细胞的核酸适体在65℃下维持5min,缓慢降至25℃,在4℃冰箱中放置2h,10000rpm离心,形成最终RNA三螺旋水凝胶。

7.根据权利要求6所述的用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA三螺旋水凝胶的制备方法,其特征在于:所述退火处理的方法为:在TEM缓冲液中加热至95℃维持5min,随即1℃/min冷却至25℃,维持30min。

8.根据权利要求6或7所述的用于三阴性乳腺癌靶向治疗的RNA三螺旋水凝胶的制备方法,其特征在于:TEM缓冲溶液组成为:1mM精胺,10.8mM MgCl2,10mM Tris-HCl,pH=8.0。

9.根据权利要求1-7任一项或权利要求8所述的制备方法制备的RNA三螺旋水凝胶在制备三阴性乳腺癌靶向治疗药物上的应用。