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专利号: 2014101476528
申请人: 浙江理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-11-06
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.靶向肝癌溶瘤腺病毒的构建方法,其特征是包括如下步骤:

1)、将作为GP73核心启动子的p-19/-677质粒,用Xho I和SnaB I双酶切后,替换掉pXC2上E1A的野生型启动子,得到携带GP73核心启动子的pXC2-GP73质粒;

所述p-19/-677,其序列如SEQ ID NO:3所示;

2)、用Xho I和Xba I双酶切pXC2-GP73得到GP73-E1A片断,与同样用Xho I和Xba I双酶切的pSD55相连,得到pSD55-GP73;当需要携带基因时,可通过PCR获得目的基因,连接到经HindⅢ和BamH I双酶切的pCA13载体上得到pCA13-gene,然后用BglⅡ单酶切得到完整的基因表达框,连接到同样经BglⅡ酶切的pSD55-GP73载体上,得到pSD55-GP73-gene质粒;

3)、将pSD55-GP73-gene质粒用PmeI线性化后转化到含有全序列腺病毒骨架DNA的质粒Adeasy-1大肠杆菌BJ5183中重组,产生E1A区由GP73核心启动子控制的以及缺失E1B55和E3区携带目的基因的腺病毒骨架DNA质粒载体;

4)、将重组鉴定正确的质粒用Pac I酶切线性化后,转染到293A细胞中进行病毒包装,待细胞出现病变后,得到目的溶瘤腺病毒GD55-gene。

2.如权利要求1所述的溶瘤腺病毒GD55-gene在制备治疗肝癌药物中的应用。