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专利号: 2019101403322
申请人: 西北师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法,其特征在于,包括以下操作步骤:

(1)取正常妊娠第4天小鼠的子宫组织,采用胰酶溶液消化处理后,去除上皮细胞,得到组织块;

(2)将组织块采用质量分数为0.2%的胶原酶II再次进行消化处理后,向其中加入组织块质量10-15%的离心助剂,然后将混合物进行离心处理,弃去上清液后,加入质量分数为

10%的PBS溶液调整细胞浓度,得到小鼠子宫原代基质细胞的单细胞悬液,其中离心助剂由以下重量份的组分制成:干酪素钠17-22份、透明质酸钠25-30份、α-酮戊二酸13-16份;

(3)将步骤(2)得到的单细胞悬液培养至细胞密度达到75-85%汇合后,换液,去除杂细胞后,向其中加入诱导培养基,诱导小鼠子宫原代基质细胞发生蜕膜化,其中诱导培养基为含有10-15nM 17β-雌二醇、1-3μM孕酮、8-12μM盐酸异丙肾上腺素和2%质量分数木炭处理胎牛血清的DMEM-F12培养基。

2.如权利要求1所述的一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法,其特征在于,上述步骤(1)中,胰酶溶液为胰酶和EDTA溶于无钙镁平衡盐溶液中,经过滤除菌制成,其中胰酶的终质量分数为0.25%,EDTA的终质量分数为0.02%。

3.根据权利要求1所述的一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法,其特征在于,上述步骤(1)中和步骤(2)中,消化处理的操作为:放在4℃冰箱和37℃细胞培养箱中各消化40min后,采用质量分数为10%的PBS溶液终止消化反应反应。

4.根据权利要求1所述的一种小鼠子宫原代基质细胞体外诱导蜕膜化的方法,其特征在于,上述步骤(2)中,离心处理时,离心机的转速为3000rpm,离心时间为15min。