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专利号: 2018107347092
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高效表达磷脂酶D的枯草芽孢杆菌工程菌,其特征在于,所述工程菌包含重组质粒与枯草芽孢杆菌表达宿主;所述重组质粒包含融合基因以及表达载体;所述融合基因为磷脂酶D基因(PLD)与枯草芽孢杆菌ɑ-淀粉酶信号肽基因(amyE)融合后的PLD-amyE;所述表达载体为pMA0911,所述枯草芽孢杆菌ɑ-淀粉酶信号肽基因来源于枯草芽孢杆菌WB168;所述磷脂酶D基因来源于链霉菌。

2.如权利要求1所述的一种高效表达磷脂酶D的枯草芽孢杆菌工程菌,其特征在于,所述重组质粒为RBS及spacer区进行过优化的重组质粒;所述优化是指将重组质粒的RBS及spacer区替换为翻译速率提升的RBS及spacer区;所述翻译速率是指RBS及spacer区的mRNA翻译成蛋白质的速率。

3.如权利要求2所述的一种高效表达磷脂酶D的枯草芽孢杆菌工程菌,其特征在于,所述优化为将重组质粒pMA0911-PLD-amyE的RBS及spacer区替换为较原始RBS及spacer区翻译速率提高3倍的RBS及spacer区。

4.一种高效表达磷脂酶D的方法,其特征在于,所述方法为使用权利要求1-3任一所述的枯草芽孢杆菌工程菌为生产菌株。

5.如权利要求4所述的一种高效表达磷脂酶D的方法,其特征在于,所述方法为先将重组枯草芽孢杆菌接种于种子培养基中,于35 37℃、180 200rpm下培养至对数生长期,作为~ ~种子液,再将种子液接入到发酵培养基中,于35 37℃、180 200rpm条件下培养36h。

~ ~

6.如权利要求5所述的一种高效表达磷脂酶D的方法,其特征在于,所述发酵培养基含有甘油15g/L,胰蛋白胨12g/L,酵母粉24g/L,磷酸二氢钾2.31g/L,三水磷酸氢二钾16.42g/L。