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专利号: 201810777468X
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌,其特征在于,所述工程菌包含重组质粒和表达宿主;所述重组质粒包含目的基因、信号肽基因以及表达载体;所述目的基因为α-淀粉酶基因;所述信号肽基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8;所述表达载体为pHY300PLK;所述表达宿主为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

2.如权利要求1所述的一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌,其特征在于,所述目的基因为来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)的高温α-淀粉酶基因。

3.如权利要求1或2所述的一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌,其特征在于,所述表达宿主为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WS5或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)K1285;

所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WS5已于2016年9月29日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2016536,保藏地址为中国.武汉.武汉大学。

4.一种生产α-淀粉酶的方法,其特征在于,所述方法为使用权利要求1-3任一所述的一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌。

5.如权利要求4所述的一种生产α-淀粉酶的方法,其特征在于,所述方法为将权利要求

1-3任一所述的一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌先接种于种子培养基中培养,得到种子液,然后将种子液接种至发酵培养基中培养。

6.如权利要求4或5所述的一种生产α-淀粉酶的方法,其特征在于,所述方法为将权利要求1-3任一所述的一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌先接种于种子培养基中,于35~38℃、180~220rpm下培养8-10h,得到种子液,然后将种子液接种至发酵培养基中,于30~37℃、180~220rpm下培养45~50h。

7.如权利要求4-6任一所述的一种生产α-淀粉酶的方法,其特征在于,所述种子培养基为的成分包含8~12g/L的蛋白胨、4~6g/L的酵母粉以及8~12g/L的氯化钠。

8.如权利要求4-7任一所述的一种生产α-淀粉酶的方法,其特征在于,所述发酵培养基的成分包含20~25g/L的酵母浸膏、5~10g/L的大豆蛋白胨以及4~6g/L的甘油;所述发酵培养基的初始pH为6~7。

9.应用权利要求1-3任一所述的一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌或权利要求4-8任一所述的一种生产α-淀粉酶的方法制备得到的α-淀粉酶。

10.权利要求1-3任一所述的一种高效表达α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌或权利要求4-8任一所述的一种生产α-淀粉酶的方法在制备α-淀粉酶、水解淀粉、制备糊精、制备低聚糖、制备麦芽糖以及制备葡萄糖方面的应用。