1.一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备SiO2,并分散于无水乙醇中,得SiO2分散液,备用;
(2)氨基修饰的SiO2纳米粒子SiO2-NH2的制备:
在3-氨基丙基三乙氧基硅烷APTES中,加入步骤(1)中得到的SiO2分散液与无水乙醇,超声分散均匀,置于水浴中反应,反应结束后,将产物用无水乙醇洗涤多次后,得到SiO2-NH2纳米粒子,备用;
(3)醛基修饰的SiO2纳米粒子SiO2-CHO的制备:
将步骤(2)中制得的SiO2-NH2纳米粒子溶于甲醇,而后加入戊二醛溶液,超声分散后用锡纸包裹避光反应,反应结束后将产物离心分离并用无水乙醇与双蒸水清洗多次,真空干燥至恒重,得到SiO2-CHO纳米粒子;
(4)PEI枝接的SiO2的制备:
称取一定量多乙烯多胺PEI和SiO2-CHO纳米粒子溶于甲醇,超声分散均匀,室温反应8-
24h,每4小时加入一定量的硼氢化钠,反应结束后,将产物离心分离,并用无水乙醇与双蒸水分别洗涤3次,最后在真空干燥,得到SiO2-PEI;
(5)4-甲酰基苯硼酸修饰的纳米粒子SiO2-FPBA的制备:
将步骤(4)制得的SiO2-PEI与一定量4-甲酰基苯硼酸FPBA分散溶解于甲醇中,室温下磁力搅拌反应8-24h,每4小时加入一定量的硼氢化钠,反应结束后,将产物离心分离,并用无水乙醇与双蒸水分别洗涤3次,最后真空干燥,得到产物SiO2-FPBA;
(6)枝状苯硼酸修饰表面印迹聚合物(SiO2-MIPs)的制备
称取步骤(5)制得的SiO2-FPBA纳米粒子,分散于PB
S缓冲溶液中,随后加入一定量的模板蛋白卵清白蛋白OVA,静置,使OVA通过硼亲和作用吸附于粒子表面,而后将粒子离心分离并用PBS缓冲溶液洗涤多次除去表面非特异性吸附的OVA,将粒子再次分散于一定量的双蒸水中,并加入一定量的盐酸多巴胺DA,搅拌溶解后缓慢滴入Tris-HCl缓冲溶液,室温反应2-10h,将产物离心分离并用无水乙醇与去离子水分别洗涤三次,随后用含有SDS的醋酸溶液洗涤产物多次直到在UV-vis光谱检测不到OVA的吸收峰,以除去模板分子OVA,用去离子水洗至中性,真空干燥,得到最终产物SiO2-MIPs。
2.如权利要求1所述的一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)和SiO2分散液体积比例为1-3:
10,SiO2分散液的浓度0.22g/mL。
3.如权利要求1所述的一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,水浴中反应的温度为45-55℃,时间为12h。
4.如权利要求1所述的一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,SiO2-NH2纳米粒子、甲醇和戊二醛溶液的比例为2.2g:10-50mL:2-
6mL,其中,戊二醛溶液的体积百分浓度为25%。
5.如权利要求1所述的一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,避光反应的温度为15-35℃,时间为8-24h,真空干燥的温度为25℃。
6.如权利要求1所述的一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物的制备方法,其特征在于,步骤(4)中,多乙烯多胺(PEI),SiO2-CHO纳米粒子和每次加入的硼氢化钠比例为(1-5g):(0.8-1.5g):(30-100mg)。
7.如权利要求1所述的一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物的制备方法,其特征在于,步骤(5)中,SiO2-PEI,4-甲酰基苯硼酸(FPBA)和每次加入硼氢化钠的比例为(0.1-0.3g):(0.1-0.5g):(30-100mg)。
8.如权利要求1所述的一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物的制备方法,其特征在于,步骤(6)中,SiO2-FPBA纳米粒子,PBS缓冲溶液,模板蛋白卵清白蛋白OVA,盐酸多巴胺DA,双蒸水和Tris-Hcl缓冲溶液比例为(30-80mg):(5-20mL):(5-15mg):(15-30mg):(15-50mL):(1-2mL),其中,PBS缓冲溶液的pH=8.5,Tris-Hcl缓冲溶液的pH=8.8,浓度为
1.5M,含有SDS的醋酸溶液的pH=4.0,SDS的质量百分含量为5%。
9.如权利要求1所述的一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物的制备方法,其特征在于,步骤(4)、步骤(5)和步骤(6)中,所述的真空干燥的条件为45℃真空干燥箱中干燥12h;步骤(6)中,静置的条件为:在4℃环境中静置1h。
10.将权利要求1~9任一项所述制备方法制得的一种基于枝状硼酸的糖蛋白分子表面印迹聚合物用于分离提纯蛋白卵清白蛋白OVA的用途。