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专利号: 2017102935799
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于生产以高甘露糖型糖链为主要N-糖链结构的糖蛋白的动物细胞株,其特征在于,所述细胞株的高尔基体甘露糖苷酶基因和内质网甘露糖苷酶基因中的至少两种基因被破坏或敲除。

2.根据权利要求1所述的动物细胞株,其中,所述高甘露糖型糖链为选自Glc1-Man9-GlcNAc2、Man9-GlcNAc2、Man8-GlcNAc2、Man7-GlcNAc2、Man6-GlcNAc2和Man5-GlcNAc2中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的动物细胞株,其中,所述细胞株来自选自人胚肾细胞(HEK293)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、COS、3T3、myeloma、BHK、HeLa、Vero中的哺乳动物细胞、或者选自爪蟾卵子细胞或昆虫细胞Sf9、Sf21、Tn5中的两栖类动物细胞。

4.根据权利要求3所述的动物细胞株,其中,所述细胞株来自人胚肾细胞(HEK293)或中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。

5.根据权利要求1所述的动物细胞株,其中,

所述破坏是通过以高尔基体甘露糖苷酶和/或内质网甘露糖苷酶基因为靶的基因破坏方法实现的,所述敲除是通过以高尔基体甘露糖苷酶和/或内质网甘露糖苷酶基因为靶的基因敲除方法实现的。

6.根据权利要求5所述的动物细胞株,其中,所述内质网甘露糖苷酶是下述蛋白:(a)由序列号43所示的DNA序列编码的蛋白

(b)与由序列号43所示的DNA序列编码的蛋白的氨基酸序列具有20%以上的同源性且具有内质网甘露糖苷酶活性的蛋白。

7.根据权利要求5所述的动物细胞株,其中,所述高尔基甘露糖糖苷酶I是下述蛋白:(a)由序列号44所示的DNA序列编码的蛋白,

(b)与由序列号44所示的DNA序列编码的蛋白的氨基酸序列具有20%以上的同源性且具有高尔基甘露糖糖苷酶I活性的蛋白,(c)由序列号45所示的DNA序列编码的蛋白,

(d)与由序列号45所示的DNA序列编码的蛋白的氨基酸序列具有20%以上的同源性且具有高尔基甘露糖糖苷酶I活性的蛋白,(e)由序列号46所示的DNA序列编码的蛋白,

(f)与由序列号46所示的DNA序列编码的蛋白的氨基酸序列具有20%以上的同源性且具有高尔基甘露糖糖苷酶I活性的蛋白。

8.根据权利要求1所述的动物细胞株,其中,所述高尔基体甘露糖苷酶基因选自高尔基体甘露糖苷酶I基因MAN1A1、MAN1A2及MAN1C1,所述内质网甘露糖苷酶基因为内质网甘露糖苷酶基因MAN1B1。

9.根据权利要求1所述的动物细胞株,其中,所述细胞株的高尔基体甘露糖苷酶I基因MAN1A1、MAN1A2和MAN1C1中的两种基因被敲除。

10.根据权利要求9所述的动物细胞株,其中,所述细胞株为MAN1A1/A2基因双敲除细胞株A1/A2–double-KO(保藏号为CCTCC No:C201767)。

11.根据权利要求1所述的动物细胞株,其中,所述细胞株的高尔基体甘露糖苷酶I基因MAN1A1、MAN1A2、MAN1C1和内质网甘露糖苷酶基因MAN1B1中的三种基因被敲除。

12.根据权利要求11所述的动物细胞株,其中,所述细胞株为MAN1A1/A2/B1基因三敲除细胞株A1/A2/B1-triple-KO(保藏号为CCTCC No:C2016193)。

13.根据权利要求1所述的动物细胞株,其中,所述糖蛋白为溶酶体酶或抗体。

14.根据权利要求13所述的动物细胞株,其中,所述溶酶体酶为人α-半乳糖苷酶或人溶酶体脂肪酶。

15.一种生产以高甘露糖型糖链为主要N-糖链结构的糖蛋白的方法,其特征在于,使用权利要求1~14所述的动物细胞株。

16.通过权利要求15所述的方法制备的以高甘露糖型糖链为主要N-糖链结构的糖蛋白。

17.根据权利要求16所述的糖蛋白,其中,所述糖蛋白为人α-半乳糖苷酶或人溶酶体脂肪酶。

18.权利要求16所述的糖蛋白在制备用于治疗溶酶体贮积症的药物中的用途。

19.根据权利要求18所述的用途,其中,所述溶酶体贮积症为法布莱病。

20.根据权利要求18所述的用途,其中,所述溶酶体贮积症为沃尔曼病或胆固醇酯贮积病。