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专利号: 2013106104264
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种普鲁兰酶突变体,其特征在于对普鲁兰酶或改造后普鲁兰酶N端结构域进行删除,所述结构域与普鲁兰酶的分泌效率或热稳定性相关。

2.权利要求1所述的突变体,其特征在于所述结构域为CBM41、X45、X25结构域或其组合。

3.根据权利要求2所述的突变体,其特征在于所述结构域为CBM41。

4.根据权利要求2所述的突变体,其特征在于所述结构域为X45。

5.根据权利要求2所述的突变体,其特征在于所述结构域为CBM41和X45或CBM41和X25。

6.根据权利要求2所述的突变体,其特征在于所述结构域为CBM41、X45和X25的组合。

7.根据权利要求1-6任一所述的突变体,其特征在于所述改造后普鲁兰酶为脱支芽孢杆菌普鲁兰酶双突变体D437H/D503Y。

8.获得权利要求1-6任一所述突变体的方法,包括如下步骤:

1)对普鲁兰酶进行分析,确定要删除的结构域;

2)设计结构域删除用引物,以携带普鲁兰酶编码基因的载体为模板进行突变并构建含结构域删除突变体的质粒载体;

3)将突变质粒转化进宿主细胞;

4)挑选阳性克隆进行发酵培养,纯化获得普鲁兰酶突变体。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于所述质粒载体为pET系列,pGEX系列,或pUB中的任一一种。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于所述宿主细胞为细菌、酵母和真菌细胞。