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专利号: 2016111127700
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种联产丙酮酸和α-酮戊二酸的重组菌,其特征在于,所述重组菌是以光滑球拟酵母为宿主,以pY26-TEF-GPD为载体,过表达丙酮酸激酶CDC19基因;所述CDC19基因是NCBI上Gene ID为851193的CDC19基因。

2.根据权利要求1所述的重组菌,其特征在于,所述重组菌是以缺失了URA3基因的光滑球拟酵母(T.glabrata)CCTCC NO.M202019为宿主,表达NCBI上Gene ID:851193的CDC19。

3.权利要求2所述的重组菌的构建方法,其特征在于,是以缺失了URA3基因的光滑球拟酵母(T.glabrata)CCTCC NO.M202019为宿主,以pY26-TEF-GPD为载体,表达NCBI上Gene ID为851193的CDC19基因。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述重组菌按如下方法构建:

(1)将目的片段CDC19经过限制性内切酶Not I和Pac I双酶切消化后,定向克隆到表达质粒pY26-TEF-GPD中,得到重组酵母表达质粒pY26-CDC19;

(2)将重组质粒pY26-CDC19电转化至受体菌T.glabrata CCTCC NO.M202019,在不含尿嘧啶的培养基中进行筛选,得到重组菌。

5.一种联产丙酮酸和α-酮戊二酸的方法,其特征在于,是将权利要求1-2任一项所述的重组菌应用于丙酮酸和α-酮戊二酸的生产。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,将权利要求1-2任一项所述的重组菌接种至发酵培养基,在30℃,200~220rpm条件下进行发酵培养。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述发酵培养基每L中含有:葡萄糖50-

120g,尿素≤5g,MgSO4.7H2O≤1g,KH2PO4≤5g,CH3COONa≤5g,微量元素液10mL,维生素液

10mL,初始pH=5.5;所述微量元素液每L含有MnCl2·4H2O≤12g,FeSO4·7H2O≤2g,CaCl2·

2H2O≤2g,CuSO4·5H2O≤0.1g,ZnCl2≤1g;所述维生素液每L含有:生物素≤0.01g,硫胺素≤2mg,吡哆醇≤0.2g,烟酸≤2g。

8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述接种的接种量按体积比为5-10%。

9.权利要求5-8任一项所述的方法在日化、食品、医药、农业领域生产含丙酮酸和/或α-酮戊二酸的产品中的应用。