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专利号: 2016104074291
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)LL-413菌株,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号:CCTCC No: M2015780,保藏日期为2015年12月25日,地址:中国武汉,武汉大学,邮编:430072。

2.一种权利要求1所述粘质沙雷氏菌LL-413菌株在制备舍雷肽酶中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用方法为:将粘质沙雷氏菌LL-413菌株接种入产酶培养基,于28~32℃、200~250 r/min发酵20~42 h,获得含有舍雷肽酶的发酵液,发酵液经过离心后去除菌体,上清液再经过盐析、透析和冷冻干燥后,即得到舍雷肽酶;

所述产酶培养基终浓度组成为:酵母浸出粉5~11 g/L,牛肉膏3.0~6.6 g/L,麦芽浸粉

10.0~12.2 g/L,MgSO4 1 g/L,NaCl 5 g/L,溶剂为水,初始pH为7.5~8.5。

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述产酶培养基终浓度组成为:酵母浸出粉11 g/L,牛肉膏6.6 g/L,麦芽浸粉12.2 g/L,MgSO4 1 g/L,NaCl 5 g/L,溶剂为水,初始pH为

8.0。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述发酵液制备方法为:

(1)将粘质沙雷氏菌LL-413菌株接种于斜面培养基,于30℃培养24~36 h,得到活化后的斜面菌体;所述的斜面培养基终浓度组成为:蛋白胨10 g/L,牛肉膏3 g/L,NaCl 5 g/L,琼脂 20 g/L,溶剂为水,初始pH为7.0;

(2)将步骤(1)活化后的斜面菌体接种至种子培养基中,于30℃、200~250 r/min振荡条件下培养18~24 h,得到种子液;所述种子培养基终浓度组成为:蛋白胨10 g/L,牛肉膏3 g/L,NaCl 5 g/L,溶剂为水,初始pH为7.0;

(3)将步骤(2)种子液以体积浓度1%~2%的接种量,移种到产酶培养基中,于30℃、200~250 r/min振荡条件下培养24~42 h,得到含舍雷肽酶的发酵液。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述应用方法为:将粘质沙雷氏菌LL-413菌株经斜面培养基进行活化后,接种入种子培养基培养18~24 h后,将种子液以体积浓度1-2%的接种量接入含产酶培养基的发酵罐中,控制温度为30±2℃,pH为8.0±0.5,调节通气量

0.6~1.0 v/v·min,搅拌转速300~500 r/min,使溶氧饱和度50%~100%,发酵运行20~24 h后,得到含有舍雷肽酶的发酵液,发酵液经过离心后去除菌体,上清液再经过盐析、透析和冷冻干燥后,即得到舍雷肽酶。

7.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述发酵液在4℃条件下5000 g离心10 min,获得上清液。

8.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述上清液再经过盐析、透析和冷冻干燥方法为:(1)往上清液中加入硫酸铵,使其饱和度达到30~45%,4℃沉淀12~24 h,之后于4℃、

8000 g条件下离心10 min,去除沉淀,收集上清液;

(2)往步骤(1)中经硫酸铵沉淀后所得的上清液中再次加入硫酸铵,使其饱和度达到70~80%,4℃沉淀12~24 h,之后于4℃、8000 g条件下离心10 min,弃去上清液,沉淀用pH值

8.0的Tris-HCl缓冲液溶解,获得浓缩液;

(3)将步骤(2)所得浓缩液用截留分子量为14 kDa的透析袋,以去离子水为透析液透析除盐后,于-40℃冷冻干燥。