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专利号: 2016104074291
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1. 粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)LL-413菌株,保藏于中国典型培养物保藏中 心,保藏编号:CCTCC N〇:M2015780,保藏日期为2015年12月25日,地址:中国武汉,武汉大 学,邮编:430072。

2. -种权利要求1所述粘质沙雷氏菌LL-413菌株在制备舍雷肽酶中的应用。

3. 如权利要求2所述的应用,其特征在于所述应用方法为:将粘质沙雷氏菌LL-413菌株 接种入产酶培养基,于28~32°C、200~250r/min发酵20~42h,获得含有舍雷肽酶的发酵 液,发酵液经过离心后去除菌体,上清液再经过盐析、透析和冷冻干燥后,即可得到舍雷肽 酶;所述产酶培养基终浓度组成为:酵母浸出粉5~1 lg/L,牛肉膏3.0~6.6g/L,麦芽浸粉 10.0~12.2g/L,MgS〇4 lg/L,NaCl 5g/L,溶剂为水,初始pH为7.5~8.5。

4. 如权利要求3所述的应用,其特征在于所述产酶培养基终浓度组成为:酵母浸出粉 1 lg/L,牛肉膏6 · 6g/L,麦芽浸粉12 · 2g/L,MgS〇4 lg/L,NaCl 5g/L,溶剂为水,初始pH为8 · 0。

5. 如权利要求3所述的应用,其特征在于所述发酵液制备方法为: (1) 将粘质沙雷氏菌LL-413菌株接种于斜面培养基,于30°C培养24~36h,得到活化后 的斜面菌体;所述的斜面培养基终浓度组成为:蛋白胨l〇g/L,牛肉膏3g/L,NaCl 5g/L,琼脂 20g/L,溶剂为水,初始pH为7.0; (2) 将步骤(1)活化后的斜面菌体接种至种子培养基中,于30°C、200~250r/min振荡条 件下培养18~24h,得到种子液;所述种子培养基终浓度组成为:蛋白胨10g/L,牛肉膏3g/L, NaCl 5g/L,溶剂为水,初始pH为7.0; (3) 将步骤(2)种子液以体积浓度1%~2%的接种量,移种到产酶培养基中,于30°C、 200~250r/min振荡条件下培养24~42h,得到含舍雷肽酶的发酵液。

6. 如权利要求3所述的应用,其特征在于所述应用方法为:将粘质沙雷氏菌LL-413菌株 经斜面培养基进行活化后,接种入种子培养基培养18~24h后,将种子液以体积浓度1-2% 的接种量接入含产酶培养基的发酵罐中,控制温度为30 ± 2°C,pH为8.0 ± 0.5,调节通气量 0.6~1.0¥八.111;[11,揽摔转速300~5001'/111;[11,使溶氧饱和度50%~100%,发酵运彳丁20~ 24h后,得到含有舍雷肽酶的发酵液,发酵液经过离心后去除菌体,上清液再经过盐析、透析 和冷冻干燥后,即可得到舍雷肽酶。

7. 如权利要求2所述的应用,其特征在于所述发酵液在4°C条件下5000g离心10min,获 得上清液。

8. 如权利要求2所述的应用,其特征在于所述上清液再经过盐析、透析和冷冻干燥方法 为: (1) 往上清液中加入硫酸铵,使其饱和度达到30~45 %,4°C沉淀12~24h,之后于4°C、 8000g条件下离心10min,去除沉淀,收集上清液; (2) 往步骤(1)中经硫酸铵沉淀后所得的上清液中再次加入硫酸铵,使其饱和度达到70 ~80%,4°C沉淀12~24h,之后于4°C、8000g条件下离心10min,弃去上清液,沉淀用pH值8.0 的Tris-HCl缓冲液溶解,获得浓缩液; (3) 将步骤(2)所得浓缩液用截留分子量为14kDa的透析袋,以去离子水为透析液透析 除盐后,于-40°C冷冻干燥,即得到舍雷肽酶冻干酶粉。