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专利号: 2018116217083
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法,其特征在于所述方法为:(1)将蚕丝丝素溶于CaC12水溶液中,加热煮沸至丝素溶解后,过滤,取滤液,获得丝素溶液;(2)将丝素溶液与pH7.5-8.0的缓冲液混合,于35-37℃水浴中预热5-10min,加入舍雷肽酶构成酶解体系,35-37℃水浴振荡酶解完全后,煮沸灭酶活,冷却后离心,取上清液,透析去除Ca2+后,冷冻干燥,获得丝素肽。

2.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法,其特征在于步骤(1)中CaC12水溶液质量浓度为40%。

3.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法,其特征在于步骤(1)中CaC12水溶液体积用量以蚕丝丝素重量计为20-30mL/g。

4.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法,其特征在于步骤(1)中蚕丝丝素按如下方法制备:将蚕茧剪碎后加入质量浓度0.5%的Na2CO3水溶液中煮沸30-

60min后,自来水冲洗,再重复煮沸和冲洗1-2次,最后用蒸馏水冲洗,于85-100℃烘箱内烘干,获得蚕丝丝素;所述Na2CO3水溶液体积用量以蚕茧重量计为40-50mL/g。

5.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法,其特征在于步骤(2)中缓冲液为pH 7.5-8.0的Tris-HCl缓冲液。

6.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法,其特征在于步骤(2)酶解体系中丝素浓度为5-10g/L;所述舍雷肽酶在酶解体系中的活力单位为300-750U/mL。

7.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法,其特征在于步骤(2)所述透析方法为:取上清液转入截留分子量为500Da的透析袋中,于流动自来水中透析,用Ca2+指示剂检验溶液中是否残留Ca2+,透析至完全除去Ca2+后,取截留液,于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥,获得丝素肽。

8.如权利要求1所述利用舍雷肽酶水解丝素制备丝素肽的方法,其特征在于所述包括以下步骤:(1)将蚕茧剪碎后加入到质量浓度0.5%的Na2CO3水溶液中煮沸30-60min,再用自来水冲洗,重复上述操作1次,将经过2次脱胶后的蚕丝用蒸馏水洗净,于85-100℃烘箱内烘干,即获得脱胶后的蚕丝丝素;所述Na2CO3水溶液体积用量以蚕茧重量计为40-50mL/g;

(2)将蚕丝丝素加入到质量浓度40%的CaC12水溶液,煮沸5-10min,待丝素溶解后,8层纱布过滤,取滤液,获得丝素溶液;所述CaC12水溶液体积用量以蚕丝丝素重量计为20-

30mL/g;

(3)将步骤(2)制备的丝素溶液加入pH 7.5-8.0、0.5mol/L的Tris-HCl的缓冲液中,于

35-37℃水浴锅中预热5-10min,加入舍雷肽酶,35-37℃水浴振荡酶解2-10h,酶解结束后,酶解体系煮沸5-10min以灭酶活,冷却后离心留上清液,转入截留分子量为500Da的透析袋

2+ 2+ 2+

中,流动自来水透析24-36h,用Ca 指示剂检验是否溶液中残留Ca ,透析至完全除去Ca ,转入洁净培养皿中,于-40℃、真空度10Pa条件下冷冻干燥,既得丝素肽粉;所述酶解体系中,丝素浓度为5-10g/L,舍雷肽酶加入量为300-750U/mL。