1.一种基于金核-银卫星手性组装体的赭曲霉毒素A的检测方法:
(一)检测传感器的构建
(1)金纳米粒子上修饰适配体OTA-aptamer
35 nm 粒径的金纳米粒子采用13 nm的金种子生长合成;35 nm 粒径的金纳米粒子离心浓缩10倍后用10mM pH7.2的磷酸盐缓冲液重悬,加入巯基化的OTA-aptamer使得终浓度为5μM;DNA与金纳米粒子的摩尔比为300︰1,室温孵育2h后加NaCl至50mM,之后每隔1h加一次NaCl,至NaCl终浓度300mM;溶液老化24h后离心3次去除未结合的DNA,10mM Tris-HCl重悬待用;
OTA-aptamer: 5’-SH-TTTTTTTTTT GATCGGGTGT GGGTGGCGTA AAGGGAGCAT CGG-3’;
(2)银纳米粒子上修饰适配体部分互补序列OTA-C
采用硼氢化钠还原硝酸银的方法合成粒径为8nm的银纳米粒子;银纳米粒子离心浓缩
10倍用10mM pH8的Tris-HCl重悬,加入OTA的巯基化部分互补序列OTA-C使得终浓度为
0.5μM,室温孵育过夜;OTA-C与银纳米粒子的摩尔比为5︰1;离心去除未结合的DNA,用Tris-HCl重悬待用;
OTA-C:5’-SH- TTTTTTTTTT CCGATGCTCC CT-3’;
(3)金核-银卫星结构的组装
30μL OTA-aptamer适配体修饰的金纳米粒子与150μL OTA-C适配体部分互补序列修饰的银纳米粒子混合,室温孵育8h,得金核-银卫星结构的组装体混合液;
(二)圆二色谱检测,建立金银手性叠加信号与赭曲霉毒素A的浓度的标准曲线六个不同浓度的赭曲霉毒素A标准品:0,10,20,100,200,500 pg/mL溶在水中;20μL标准品溶液与180μL步骤(3)的金核-银卫星结构的组装体混合液混合,室温孵育8h;
反应结束后测圆二色谱CD,∑CD= CD400 nm + CD527 nm,以 ∑CD为信号建立与赭曲霉毒素A浓度的标准曲线,赭曲霉毒素A的浓度为横坐标,∑CD为纵坐标。