1.一种利用四倍体植株与二倍体植株杂交育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)优选出抗逆性好、生长快、茎秆粗、茎高长、分蘖多、纤维含量低、药效成分含量高的不同产地的霍山石斛品种作为多倍体培育的源植株亲本;
(2)对不同品种源植株种子在固体培养基中进行无菌播种,获得2倍体原球茎;
(3)制备不同品种2倍体原球茎的原生质体,进行细胞原生质体融合,并培养成愈伤组织;
(4)对检测出的四倍体愈伤组织进行诱导分化,获得四倍体植株幼苗;
(5)对四倍体植株幼苗进行常规炼苗驯化和栽培至开花;
(6)把四倍体植株与二倍体植株人工授粉杂交,结实,即得三倍体霍山石斛种子;(7)对三倍体种子无菌播种、培养,获得大量三倍体幼苗。
2.根据权利要求1所述的利用四倍体植株与二倍体植株杂交育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(1)中所述霍山石斛为分布在大别山山系的不同产地具有优良性状的品种,其中高纬度、高海拔地区的品种具有抗逆性强、茎秆粗、药效成分含量高的特点,低纬度、低海拔地区的品种具有生长速度快、茎高长、分蘖多、纤维含量低的特点。
3.根据权利要求1所述的利用四倍体植株与二倍体植株杂交育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(2)中所述培养为在固体培养基培养,适合诱导愈伤组织的培养基均可,优选大量元素减半的1/2MS培养基,调整蔗糖浓度为5%-8%,优选添加10-15%的椰乳,2,4-D 0.2-2.0 mg/L, NAA 0.2-2.0 mg/L;培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内,光照时间10-12小时,光照强度2000-3000Lux,色温在4500-5500k。
4.根据权利要求1所述的利用四倍体植株与二倍体植株杂交育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(3)中所述原生质体的制备方法优选酶解法制备,原生质体融合办法优选电击融合法。
5.根据权利要求1所述的利用四倍体植株与二倍体植株杂交育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(4)中所述四倍体为异源双二倍体或同源双二倍体;所述检测染色体倍数为常规染色镜检办法,选取染色体数目2n=4x=76的幼苗,是培育成功的四倍体。
6.根据权利要求1所述的利用四倍体植株与二倍体植株杂交育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(6)中所述四倍体植株与二倍体植株在花期人工授粉杂交,四倍体植株与二倍体植株可以互为父本和母本。
7.权利要求1-6中任何一项所述培育方法得到的三倍体霍山石斛。