1.一种利用二倍体细胞与花粉细胞融合育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)优选出抗逆性好、株型大、生长快、药效成分含量高的不同产地的霍山石斛品种作为三倍体培育源植株;
(2)对源植株种子在固体培养基中进行无菌播种,获得原球茎;
(3)对源植株花粉在固体培养基中进行无菌培养,获得花粉细胞群;
(4)制备花粉细胞和原球茎细胞的原生质体,进行细胞融合;
(5)在固体培养基上对融合细胞进行培养分化成幼株,检测出三倍体植株;
(6)对三倍体植株进行无性组培,获得大量三倍体幼苗。
2.按照权利要求1所述的利用二倍体细胞与花粉细胞融合育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(1)中所述霍山石斛为分布在大别山山系的不同产地具有优良性状的品种,其中高纬度、高海拔地区的品种具有抗逆性强、茎秆粗、药效成分含量高的特点,低纬度、低海拔地区的品种具有生长速度快、茎高长、分蘖多、纤维含量低的特点。
3.按照权利要求1所述的利用二倍体细胞与花粉细胞融合育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(2)和步骤(3)中所述培养为固体培养基,适合诱导愈伤组织的培养基均可,优选大量元素减半的1/2MS培养基,调整蔗糖浓度为5%-8%,优选添加
10-15%的椰乳,2,4-D 0.2-2.0 mg/L, NAA 0.2-2.0 mg/L;培养温度在25-18℃的昼夜温差范围内,光照时间10-12小时,光照强度2000-3000Lux,色温在4500-5500k。
4.按照权利要求1所述的利用二倍体细胞与花粉细胞融合育种法培育三倍体霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(4)中所述原生质体的制备方法优选酶解法制备,原生质体融合办法优选电击融合法。
5.按照权利要求1所述的一种三倍体霍山石斛的培育方法,其特征在于:步骤(5)中所述检测染色体倍数采用常规染色镜检办法,选取染色体数目2n=3x=57的幼苗,是培育成功的三倍体。
6.权利要求1-5中任何一项所述培育方法得到的三倍体霍山石斛。