1.一种用于检测汞离子的固态电化学发光传感器,其特征在于:所述的工作电极表面固载有电聚合的 N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI),所述的 N-(4-氨丁基)-N-乙基
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异鲁米诺上依次组装有戊二醛、DNA1、通过T-Hg -T错配结合的DNA2以及生物素。
2.根据权利要求1所述的用于检测汞离子的固态电化学发光传感器,其特征在于:所述的工作电极为玻碳电极。
3.一种根据权利要求1所述的用于检测汞离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于具体步骤如下:(1)固载有DNA1玻碳电极的制备
a. 将直径为3~5 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm的三氧化二铝抛光处理,然后依次用乙醇、水超声清洗,水冲洗干净后,氮气吹干备用;
b. 将步骤(a)所得玻碳电极置于含 N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI)的H2SO4溶液中,进行循环伏安扫描,电压范围为−0.2~1.5 V,以0.01~0.1 V/s的扫速循环扫描20~30圈,使ABEI在玻碳电极表面电聚合;所述的含 N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI)的H2SO4溶液中 N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺(ABEI)浓度为0.01~0.0001 mol/L,H2SO4浓度为0.1~1 mol/L;
c. 将步骤(b)所得玻碳电极用pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液冲洗干净后,在玻碳电极表面滴加1~3 wt%戊二醛溶液10~20 μL,静置20~40分钟;
d. 将步骤(c)所得玻碳电极用pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液冲洗干净后,在玻碳电极表面滴加含10 μmol/L DNA1的pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液10~
20 μL,静置20~40 min,使DNA1结合到电极表面;
e. 将步骤(d)所得玻碳电极浸泡在10~20 μL质量百分浓度为2%的牛血清白蛋白溶液中,封闭1~2 h,即得固载有DNA1的玻碳电极;
(2)固态电化学发光传感器的组装
a. 配制一系列不同浓度的含汞离子的标准溶液,将标准溶液与含10 μmol/L DNA2的pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液按体积比1:1混合;
b. 取步骤(a)所得的混合溶液10~20 μL,滴加到固载有DNA1的玻碳电极表面,室温下孵育20~30 min后,用pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液清洗;
c.取适量pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液配制0.01~0.1 mg/mL 的亲和素溶液,将10~20 μL亲和素溶液滴加到步骤(b)所得玻碳电极表面,孵育5 min后;
d.将步骤(c)所得的玻碳电极用pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液清洗后,即得到用于汞离子检测的固态电化学发光传感器。
4.根据权利要求3所述的一种用于检测汞离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于:所述的DNA1的结构式为:5’-NH2-(CH2)6-GACTGTCTCGTTCGCTTAG-3’;所述的DNA2的结构式为:5’-biotin-CTATGCGTACGTGACTGTC-3’。
5.一种根据权利要求1-4中任一项所述的检测汞离子的固态电化学发光传感器的检测方法,其特征在于具体步骤如下:(1)标准曲线建立
a.将权利要求3所述的固载有DNA1的玻碳电极用0.01~0.1 M PBS缓冲液冲洗干净后,在pH = 9~10的0.05~0.2 M碳酸盐缓冲液中,启动电化学反应,测试电化学发光强度I0;
b.将权利要求3所述的用于汞离子检测的固态电化学发光传感器放入pH = 9~10的0.05~0.2 M碳酸盐缓冲液,启动电化学反应,测量电化学发光强度,获得一系列不同浓
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度的Hg 溶液对应的电化学发光强度值I1,计算一系列不同浓度的Hg 溶液电化学发光强
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度的改变值ΔI= I0−I1,建立电化学发光强度的改变值ΔI与Hg 溶液浓度之间的定量关系;
(2)待测样品测定
a.将含汞离子的待测样品溶液与含10 μmol/L DNA2的pH7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液按体积比1:1混合;
b. 取步骤(a)所得的混合溶液10~20 μL,滴加到固载有DNA1的玻碳电极表面,室温下孵育20~30 min后,用pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液清洗;
c.将10~20 μL用pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液配制的0.01~0.1 mg/mL 的亲和素溶液滴加到步骤(b)所得玻碳电极表面,孵育5 min后;
d.将步骤(c)所得的玻碳电极用pH = 7~8的0.01~0.1 M PBS缓冲液清洗后,作为工作电极,饱和甘汞电极或者Ag/AgCl电极为参比电极,铂丝电极为对电极,构建三电极系统,置入pH = 9~10的0.05~0.2 M碳酸盐缓冲液中,启动电化学反应,测试电化学发
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光强度值,根据电化学发光强度的改变值ΔI与Hg 溶液浓度之间的定量关系,计算得到待
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测样品溶液中Hg 的准确浓度CHg。
6.根据权利要求5所述的一种检测汞离子的固态电化学发光传感器的检测方法,其特征在于:所述的碳酸盐缓冲液中含1 mM的过氧化氢,采用的电化学方法为电位阶跃计时电流法;电位阶跃:0 V阶跃至1 V;脉冲宽度:0.25 s;测量时间间隔:30 s。