1.一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于具体包括以下步骤:(1)多聚L-赖氨酸膜制备
将多聚L-赖氨酸溶于0.2M、pH=8~9的碳酸盐缓冲液中配制1~3wt%的多聚L-赖氨酸溶液,将多聚L-赖氨酸溶液与含有0.001M电化学发光体的二甲基甲酰胺溶液按体积比20:1的比例混合,反应2~6小时后,取反应得到的混合溶液5μL,滴涂于电极表面,干燥,即可在电极表面形成均匀的多聚L-赖氨酸膜;所述的电化学发光体的结构式为Ru-P3X2,其中Ru为配合物中心离子,P为配体,3个配体中至少一个为含有N-琥珀酰亚胺酯基团的配体,X为一价阴离子;
(2)脱氧核酶结合物溶液制备
将100μM的DNA1溶液与100μM的DNA2溶液等体积混合均匀,于90℃水浴反应5min,自然冷却至室温后得到50μM的脱氧核酶结合物溶液,脱氧核酶结合物结构如下:其中所述的DNA1的结构式为:
NH2-3'-AGTCTACACTAGG rA TATGTG-5'-biotin;所述的DNA2的结构式为:
5'-TCAGATGTGATCTCCGAGCCGGTCGAAATACAC-3';
(3)电化学发光传感器制备
在多聚L-赖氨酸膜上滴加5~10μL的1~3wt%戊二醛溶液,静置20~40分钟后,用pH7~8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗;继续在多聚L-赖氨酸膜上滴加5~10μL的浓度为1~10μM的脱氧核酶结合物溶液,静置30~60分钟,直至脱氧核酶结合物偶联到电极表面,用pH7~
8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗;再在多聚L-赖氨酸膜上滴加5~10μL的浓度为2wt%的牛血清蛋白溶液,静置20~40分钟,封闭非活性位点,用pH7~8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗;最后在多聚L-赖氨酸膜上滴加5~10μL的0.01~0.1mg/mL亲和素溶液,孵 育5min后,用pH7~8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗,即得到检测铅离子的固态电化学发光传感器。
2.根据权利要求1所述的一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的配体为二联吡啶或/和邻菲啰啉。
3.根据权利要求1所述的一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的一价阴离子为六氟磷酸根离子或者氯离子。
4.根据权利要求1所述的一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的电极为玻碳电极、石墨电极、ITO电极和贵金属电极中的任一种。
5.一种根据权利要求1-4中任一项所述的检测铅离子的固态电化学发光传感器的使用方法,其特征在于包括以下步骤:(1)以检测铅离子的固态电化学发光传感器为工作电极,饱和甘汞电极或者Ag/AgCl电极为参比电极,铂丝电极为对电极,构建三电极系统;
(2)在电化学发光测试液中,测试电化学发光强度I0,采用的电化学方法:电位阶跃计时电流法;电位阶跃:0V阶跃至1.6V;脉冲宽度:0.1s;测量时间间隔:30s;
(3)在工作电极表面滴加含Pb2+的待测溶液5μL,30min后,用pH7~8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗,在电化学发光测试液中,测试电化学发光强度I1;
(4)计算待测溶液的电化学发光强度的改变值ΔI=I1-I0,根据电化学发光强度的改变值ΔI与Pb2+浓度值之间的定量关系,计算获得含Pb2+的待测溶液中Pb2+的浓度值CPb。
6.根据权利要求5所述的一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的使用方法,其特征在于:所述的电化学发光测试液为0.1M pH7~8的PBS缓冲液和1M三丙胺溶液按体积比
97:3的比例混合而成。