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专利号: 2014102912952
申请人: 宁波大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-07-20
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于具体包括以下步骤:(1)多聚L-赖氨酸膜制备

将多聚L-赖氨酸溶于0.2M、pH=8~9的碳酸盐缓冲液中配制1~3wt%的多聚L-赖氨酸溶液,将多聚L-赖氨酸溶液与含有0.001M电化学发光体的二甲基甲酰胺溶液按体积比20:1的比例混合,反应2~6小时后,取反应得到的混合溶液5μL,滴涂于电极表面,干燥,即可在电极表面形成均匀的多聚L-赖氨酸膜;所述的电化学发光体的结构式为Ru-P3X2,其中Ru为配合物中心离子,P为配体,3个配体中至少一个为含有N-琥珀酰亚胺酯基团的配体,X为一价阴离子;

(2)脱氧核酶结合物溶液制备

将100μM的DNA1溶液与100μM的DNA2溶液等体积混合均匀,于90℃水浴反应5min,自然冷却至室温后得到50μM的脱氧核酶结合物溶液,脱氧核酶结合物结构如下:其中所述的DNA1的结构式为:

NH2-3'-AGTCTACACTAGG rA TATGTG-5'-biotin;所述的DNA2的结构式为:

5'-TCAGATGTGATCTCCGAGCCGGTCGAAATACAC-3';

(3)电化学发光传感器制备

在多聚L-赖氨酸膜上滴加5~10μL的1~3wt%戊二醛溶液,静置20~40分钟后,用pH7~8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗;继续在多聚L-赖氨酸膜上滴加5~10μL的浓度为1~10μM的脱氧核酶结合物溶液,静置30~60分钟,直至脱氧核酶结合物偶联到电极表面,用pH7~

8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗;再在多聚L-赖氨酸膜上滴加5~10μL的浓度为2wt%的牛血清蛋白溶液,静置20~40分钟,封闭非活性位点,用pH7~8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗;最后在多聚L-赖氨酸膜上滴加5~10μL的0.01~0.1mg/mL亲和素溶液,孵 育5min后,用pH7~8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗,即得到检测铅离子的固态电化学发光传感器。

2.根据权利要求1所述的一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的配体为二联吡啶或/和邻菲啰啉。

3.根据权利要求1所述的一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的一价阴离子为六氟磷酸根离子或者氯离子。

4.根据权利要求1所述的一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的电极为玻碳电极、石墨电极、ITO电极和贵金属电极中的任一种。

5.一种根据权利要求1-4中任一项所述的检测铅离子的固态电化学发光传感器的使用方法,其特征在于包括以下步骤:(1)以检测铅离子的固态电化学发光传感器为工作电极,饱和甘汞电极或者Ag/AgCl电极为参比电极,铂丝电极为对电极,构建三电极系统;

(2)在电化学发光测试液中,测试电化学发光强度I0,采用的电化学方法:电位阶跃计时电流法;电位阶跃:0V阶跃至1.6V;脉冲宽度:0.1s;测量时间间隔:30s;

(3)在工作电极表面滴加含Pb2+的待测溶液5μL,30min后,用pH7~8的0.01~0.1M PBS缓冲液清洗,在电化学发光测试液中,测试电化学发光强度I1;

(4)计算待测溶液的电化学发光强度的改变值ΔI=I1-I0,根据电化学发光强度的改变值ΔI与Pb2+浓度值之间的定量关系,计算获得含Pb2+的待测溶液中Pb2+的浓度值CPb。

6.根据权利要求5所述的一种检测铅离子的固态电化学发光传感器的使用方法,其特征在于:所述的电化学发光测试液为0.1M pH7~8的PBS缓冲液和1M三丙胺溶液按体积比

97:3的比例混合而成。