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专利号: 2014100576069
申请人: 江西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株转化甘草酸生成甘草次苷的东乡野生稻内生真菌,其特征是:所述的内生真菌是从东乡野生稻植物活体的叶片组织中采用内生真菌分离纯化技术分离获得,经微生物分类学鉴定命名为Aspergillus flavus DX-SEL2,已保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期为2013年12月23日,保藏号为CCTCCNO:M 2013686,该菌能转化甘草酸生成甘草次苷。

2.如权利要求1所述的Aspergillus flavus DX-SEL2菌株,其特征在于:在PDA培养基上,28±1℃培养2天,菌落直径30~32mm,3天菌落直径为61~63mm,4天长满整个培养皿;质地丝绒状,较厚,中央现絮状,菌落正面呈橄榄绿色,边缘略白色;反面为淡黄色,分生孢子梗无色或浅棕色,直径为10~15µm;分生孢子顶囊近乎球形,直径为50~65µm,分生孢子球形至近球形,直径为2.5~4.5µm。

3.如权利要求1所述的Aspergillus flavus DX-SEL2菌株,其特征在于:其基因登录号为KC871017。

4.如权利要求1所述的内生真菌Aspergillus flavus DX-SEL2转化甘草酸生成甘草次苷的方法,其特征在于包括以下步骤:步骤一、将内生真菌Aspergillus flavus DX-SEL2,接种到PDA斜面培养基中培养活化

72~84小时,并制作孢子悬浮液,然后接种至种子培养基中,25~35℃,150~300r/min,摇床培养至对数生长期;

步骤二、按照10%~40%的接种量把上述对数生长期的种子液接种至含甘草酸的转化培养基中,转化产生甘草次苷至含量基本恒定;步骤三、从发酵液中分离纯化甘草次苷。

5.如权利要求4所述的内生真菌转化甘草酸生成甘草次苷的方法,其特征是,步骤一中种子培养基的组成为:每升培养基中含葡萄糖10~40g,甘草酸(或甘草酸铵盐)0.1~

1g,KH2PO4 1.0~3.0g, NH4NO3 2.0~5.0g, NaCl 0.3~0.8 g,酵母粉0.05~0.3 g, MgSO40.1~0.5g,CaCl20.01~0.5g,FeSO4 0.014g,ZnSO4·7H2O 2.9mg,MnCl2·4H2O 2.0mg,CuSO4·5H2O 0.25mg,CoCl2·6H2O 0.24mg,Na2MoO4·2H2O 0.24mg, H3BO3 0.03mg, 其余为纯水,调pH为5.0~7.0。

6.如权利要求4所述的内生真菌转化甘草酸生成甘草次苷的方法,其特征是,在步骤二中转化培养基组成为:每升培养基中含甘草酸(或甘草酸铵盐) 2~30g, KH2PO4 1.0~

3.0g, NH4NO3 2.0~4.0g, NaCl 0.3~0.8 g,酵母粉0.05~0.1g, MgSO4 0.1~0.5g, CaCl2

0.01~0.5g, FeSO4 0.014g , ZnSO4·7H2O 2.9mg, MnCl2·4H2O 2.0mg,CuSO4·5H2O 0.25mg, CoCl2·6H2O 0.24mg, Na2MoO4·2H2O 0.24mg, H3BO3 0.03mg,其余为纯水,调pH为3.5~9.0;

其中甘草酸(或甘草酸铵盐)是菌体产β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导剂。

7.如权利要求4所述的内生真菌转化甘草酸生成甘草次苷的方法,其特征是,在步骤二中培养条件为:28℃~60℃,转速150~300r/min。

8.如权利要求4所述的内生真菌转化甘草酸生成甘草次苷的方法,其特征是,在步骤三中甘草次苷的分离纯化包含以下步骤:布氏漏斗抽滤或六层纱布过滤,收集滤液,用氯仿等体积萃取2~4次,水相继续用乙酸乙酯等体积萃取3~5次,得到乙酸乙酯相减压浓缩即为甘草次苷粗品,然后再用正相硅胶柱层析或反相柱层析等方法进一步纯化甘草次苷。