1.一种催化活性提高的葡萄糖氧化酶突变体,其特征在于,氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的突变体,其特征在于,是以GenBank:X16061.1所示的序列为出发基因序列,通过定点突变,将葡萄糖氧化酶第50位谷氨酸突变为酪氨酸、将第559位组氨酸突变为苏氨酸。
3.编码权利要求1所述葡萄糖氧化酶突变体的基因。
4.携带权利要求3所述基因的质粒。
5.表达权利要求3所述基因的基因工程菌。
6.构建权利要求5所述基因工程菌的方法,其特征在于,具体包括如下步骤:
1)采用化学全合成或PCR方法克隆编码所述氧化酶突变体的基因GODTB;
2)将步骤1)获得的GODTB基因连接到毕赤酵母表达载体,得到重组表达载体;
3)将步骤2)获得的重组表达载体转化Pichiapastoris GS115得到基因工程菌。
7.权利要求6所述的方法,其特征在于,所述表达载体为pPIC9k。
8.应用权利要求5所述基因工程菌发酵生产葡萄糖氧化酶突变体的方法,其特征在于,将基因工程菌经种子培养基活化后接种到基本发酵培养基中,于30℃、200rpm条件下培养;当OD600值为1.2-1.5时,将菌株转入诱导培养基中诱导蛋白的产生。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述诱导培养基组成为每1L含有:胰蛋白胨20g,酵母抽提物10g,甲醇8mL,YNB 13.4g,pH 6.0的100mM磷酸缓冲液。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,诱导过程甲醇浓度维持在每100mL溶液中含有甲醇1.8g。