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专利号: 2013102526549
申请人: 广西大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条,其特征在于:包括有支撑被衬(1),该支撑被衬上依次粘贴有包被膜(4)、标记垫(3)和样品垫(2),在所述支撑被衬(1)的手持端(1-1)粘贴有吸水垫(5);所述标记垫(3)包被有抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体,所述包被膜(4)上前部设有检测线(T),所述包被膜(4)上后部设有质控线(C),所述检测线(T)包被有抗大片形吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体,所述质控线(C)包被有兔抗小鼠免疫球蛋白抗体。

2.根据权利要求1所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条,其特征在于:所述样品垫(2)由玻璃纤维膜制成,所述标记垫(3)由聚酯纤维膜制成,所述包被膜(4)为硝酸纤维素膜,所述吸水垫(5)为粗纤维吸水纸,所述支撑被衬为聚氯乙烯板。

3.根据权利要求1或2所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条,其特征在于:所述标记垫(3)包被的7D1单克隆抗体为胶体金标记的抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体。

4.权利要求1-3所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条的制备方法,其特征在于其制备步骤如下:A、包被膜(4)的制备;

a.由硝酸纤维素膜制成包被膜(4)上同一面的两端分别设置有检测线(T)和质控线(C);

b.检测线(T)设置在包被膜(4)的一端,检测线(T)上包被有大片吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体,能够识别大片吸虫ES抗原;

c.质控线(C)设置在包被膜(4)的另一端,质控线(C)包被有兔抗小鼠免疫球蛋白抗体;

d.将抗大片形吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体稀释至包被浓度为0.15 mg/mL -0.50 mg/mL,按包被量为每垫0.5μL -5μL包被至包被膜的检测线(T)上;兔抗小鼠免疫球蛋白抗体稀释至0.10 mg/mL -0.50 mg/mL的浓度,按包被量为每垫0.5μL -5μL包被至包被膜的质控线(C)上,干燥,密封保存;

B、标记垫(3)的制备;

a.以常规的方法进行胶体金的制备和单克隆抗标记;

b.将胶体金和单克隆抗标记的抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体1:5稀释后,以每垫5μL-25μL的量喷点在标记垫进行包被,然后将标记垫干燥、密封保存,所述抗大片形吸虫的ES抗原的7D1单克隆抗体能特异识别大片形吸虫ES抗原;

C、样品垫(2)的制备;

样品垫(2)由玻璃纤维膜制成;

D、将样品垫(2)、标记垫(3)、包被膜(4)、吸水垫(5)依次搭接粘贴在支撑衬板(1)上,即得到本大片形吸虫免疫层析快速检测纸条。

5.根据权利要求4所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条的制备方法,其特征在于:D步骤中将标记垫烘干的温度为36°C-38°C,E步骤中干燥的温度为36°C-38°C。

6.根据权利要求1或4或5所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条的制备方法,其特征在于:兔抗小鼠免疫球蛋白抗体的制备方法是,把质量浓度为1mg/mL的小鼠免疫球蛋白与弗氏完全佐剂按1:0.5-1.5比例混匀,按0.5ml-2.0ml /只兔子的剂量对兔子进行脚掌皮下注射免疫;6-8天后,用质量浓度为2mg/ml的小鼠IgG与弗氏不完全佐剂按1:

0.5-1.5比例混匀,以0.5ml-2.0ml/只兔子的剂量对上述兔子进行胭淋巴结注射二次免疫;9-11天后,按二次免疫的方法加强免疫一次,免疫后,定期耳静脉采血测定血清效价,血清效价到达后,心脏采血,分离血清;采用常规的辛酸—饱和硫酸铵法初步纯化纯后,再用 portion G 蛋白柱进一步纯化;当用常规的琼脂扩散试验测定的兔抗小鼠免疫球蛋白4

二抗效价为1:10,用BCA蛋白浓度试剂盒测定兔抗小鼠免疫球蛋白二抗浓度为1.22 mg/ml时,兔抗小鼠免疫球蛋白抗体的制备完成,在4℃的条件下保存待用。