1.一种基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)Fe3O4/Au复合纳米粒子的制备
将粒径为20~200nm的Fe3O4纳米粒子、柠檬酸钠、氯金酸溶液加入水中混合均匀,然后在100~120℃下反应,得到Fe3O4/Au复合纳米粒子;
2)金磁纳米酶免疫探针的制备
采用物理吸附法或化学法将Fe3O4/Au复合纳米粒子与靶标分子的第一个识别抗体结合,得到金磁纳米酶免疫探针;
3)基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸的制备
将靶标分子的第二个识别位点均匀喷涂在侧向流免疫层析检测试纸的硝酸纤维素膜的检测线上,将多克隆抗体二抗均匀喷涂在侧向流免疫层析检测试纸的硝酸纤维素膜的质控线上,将金磁纳米酶免疫探针喷涂在侧向流免疫层析检测试纸的结合垫上,得到基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸。
2.根据权利要求1所述的基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸的制备方法,其特征在于,步骤1)中,氯金酸溶液的浓度为24mmol/L;
Fe3O4纳米粒子、柠檬酸钠、氯金酸溶液和水的反应投料比为(100~150)mg:(0.1~0.5)g:(1~5)mL:(100~200)mL。
3.根据权利要求1所述的基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸的制备方法,其特征在于,侧向流免疫层析检测试纸的制备过程具体包括:将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜分别置于样品垫处理缓冲溶液、结合垫处理缓冲溶液和硝酸纤维素膜处理缓冲溶液中,浸泡后干燥,得到处理过的样品垫、处理过的结合垫和处理过的硝酸纤维素膜,然后将处理过的样品垫、处理过的结合垫、处理过的硝酸纤维素膜和吸水纸依次贴在支撑板上,并保证每两个部分之间有2mm宽的重叠部分,得到侧向流免疫层析检测试纸。
4.根据权利要求3所述的基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸的制备方法,其特征在于,将质量比为2%的NaCl、0.05%的牛血清蛋白、0.1%的聚乙烯吡咯烷酮和体积比为0.05%的吐温‑20溶于pH值为8.0~9.0、离子强度为0.005~20mol/L的硼酸钠缓冲液,制得样品垫处理缓冲溶液;
将质量比为1%的牛血清蛋白、0.05%的聚乙二醇和体积比为1%的吐温‑20溶于pH值为8.0~9.0、离子强度为0.005~20mol/L的硼酸钠缓冲液,制得结合垫处理缓冲溶液;
将质量比为0.05%的聚乙二醇、1%的牛血清蛋白和体积比为0.005%的吐温‑20溶于pH值为8.0~9.0、离子强度为0.005~20mol/L的硼酸钠缓冲液,制得硝酸纤维素膜处理缓冲溶液。
5.根据权利要求3所述的基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸的制备方法,其特征在于,样品垫置于样品垫处理缓冲溶液中浸泡20~30h,在50~60℃的烘箱中干燥2~5h;
结合垫置于结合垫处理缓冲溶液中的浸泡20~30h,在50~60℃的烘箱中干燥2~5h;
硝酸纤维素膜置于硝酸纤维素膜处理缓冲溶液中浸泡1~5h后,取出冷冻干燥。
6.根据权利要求1所述的基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸的制备方法,其特征在于,步骤3)中,检测线和质控线相距6~10mm。
7.采用权利要求1~6任意一项所述的制备方法制得的基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸。
8.采用权利要求7所述的基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸用于双抗夹心法检测的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,包括以下操作:
①将5~20μL、浓度为5~10mmol/L的显色有机底物和5~50μL、浓度为10~50mmol/L的H2O2溶液均匀混合得到混合溶液,然后将混合溶液pH值调至3~5得到酸性混合液;
②向所述基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸中处理过的样品垫部分,滴加含待测抗原的标准品或实际样品溶液,静置15~20min;然后,向所述基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸中处理过的硝酸纤维素膜部分滴加步骤①制得的酸性混合液,使检测线和质控线上发生免疫反应的金磁纳米酶免疫探针发生显色反应;
③当检测线和质控线同时出现条带,则为阳性;当只有质控线出现条带,为阴性;当质控线无条带或只有检测线有条带,则检测结果无效。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,显色有机底物包括四甲基联苯胺,重氮胺基苯,联氮二胺盐或3‑胺基‑9‑乙基咔唑。