1.一种牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条,其特征在于,包括PVC底板(1)、以及依次设置在所述PVC底板上的样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水垫(5),所述结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的山羊抗牛IgG抗体,所述硝酸纤维素膜上设有间隔开的检测线(6)和质控线(7),检测线上包被有重组多表位抗原,质控线上包被有兔抗山羊IgG二抗,其中,所述重组多表位抗原由以下七个肽段连接而成:
B1:DDGLTSTSRSVMKMFGEVKYFFERDPLGQK;
B2:KDEPKAHMGQVVKKRWGELRDFFRND;
B3:LGEIRDFFRSDPLGQKLVALGRDLTAI;
B4:KGMGVETRTTETPLRKHFNLTPVGSQGI;
B5:TGNCDQGKAQSANVTG;
B6:ECSPHTCLEHRYRRCVD;
B7:GKISCAELKSALQSCSA;
所述重组多表位抗原是如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条,其特征在于,编码所述重组多表位抗原的基因是如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条,所述重组多表位抗原的制备方法:构建含有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的目的基因的重组表达载体,转入BL21(DE3)表达感受态中,进行蛋白小量诱导表达确定培养条件后,进行蛋白大量诱导表达,利用不同梯度的咪唑洗脱与蛋白结合后的Ni‑Agarose,进而获得高纯度的重组多表位抗原。
4.一种权利要求1所述的牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1结合垫的制备:用山羊抗牛IgG抗体对时间分辨荧光微球进行标记,然后添加4倍体积的荧光工作液进行稀释,混合均匀,喷涂在结合垫上,烘干;
S2硝酸纤维素膜的制备:将所述重组多表位抗原稀释成1 mg/mL喷涂于检测线所在位置,兔抗山羊IgG二抗稀释成2 mg/mL喷涂于质控线所在位置,烘干;
S3试纸条的组装:样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸从左到右顺次搭接安装在PVC底板上。
5.根据权利要求4所述的牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条的制备方法,其特征在于,所述山羊抗牛IgG抗体的标记量为50 μg/mL;所述荧光工作液是0.01M磷酸盐缓冲液。
6.根据权利要求4所述的牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条的制备方法,其特征在于,S1和S2的喷涂步骤中,包被参数均为0.75 μL/cm。
7.根据权利要求4所述的牛细粒棘球蚴病时间分辨荧光免疫层析检测试纸条的制备方法,其特征在于,采用0.1M Na2B4O7·10H2O、1%PVP、0.2%Casein‑Na、1%Triton‑X100、1%Tetronic 1307、0.2%NaN3,调至pH=9.3的样品垫处理液对样品垫进行处理。