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专利号: 2013101035925
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种特异性克伦特罗人工抗原的合成方法,其特征在于以4-氨基-3,5 -二氯苯甲酸为半抗原,将4-氨基-3,5 -二氯苯甲酸上的羧基通过1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化、或者通过三正丁胺与氯甲酸异丁酯活化,再与载体蛋白进行偶联得到克伦特罗人工抗原,将人工抗原透析,工艺为:(A)将4-氨基-3,5 -二氯苯甲酸用N,N-二甲基甲酰胺DMF溶解,4-氨基-3,5 -二氯苯甲酸与N-羟基琥珀酰亚胺NHS,1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC的摩尔比为1: 1.5: 2,在4℃避光搅拌反应1h,再在室温反应12h,得活化的半抗原溶液;

取牛血清白蛋白,半抗原与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1,牛血清白蛋白用0.1M pH9.6 碳酸盐缓冲液溶解,其中溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL,且碳酸盐缓冲液与N,N-二甲基甲酰胺DMF的体积比例为5:1;将活化的半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中,室温反应24h,用PBS缓冲液透析2天,期间更换PBS缓冲液4次,得到克伦特罗人工抗原;

或(B)将4-氨基-3,5 -二氯苯甲酸用N,N-二甲基甲酰胺DMF溶解,4-氨基-3,5 -二氯苯甲酸与三正丁胺,氯甲酸异丁酯的摩尔比为1: 1.2: 1.2,0℃反应1h,得活化的半抗原溶液;

取牛血清白蛋白,半抗原与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1,牛血清白蛋白用 0.1M pH9.6 碳酸盐缓冲液溶解,0℃预冷30min,其中溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL,且碳酸盐缓冲液与N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的体积比例为5:1;在0℃条件下,将活化的半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中,0℃条件下反应1h,然后室温反应24h;用PBS缓冲液透析2天,期间更换PBS缓冲液4次,得到克伦特罗人工抗原。

2.根据权利要求1所述的特异性克伦特罗人工抗原的合成方法,其特征在于克伦特罗人工抗原的分子结构式如式I所示:式I。

3.用权利要求1所述方法合成的特异性克伦特罗人工抗原的应用,其特征在于制备克伦特罗抗体,所述抗体为多克隆抗体和/或单克隆抗体。

4.用权利要求1所述方法合成的特异性克伦特罗人工抗原的应用,其特征在于在检测克伦特罗中的应用,检测食品中的克伦特罗残留。