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专利号: 2013101068882
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-10-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种特异性莱克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于以章鱼胺和乙酰丙酸乙酯为原料合成莱克多巴胺半抗原即化合物I,化合物I通过1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化、或者通过三正丁胺与氯甲酸异丁酯活化,再与载体蛋白进行偶联制得莱克多巴胺人工抗原即化合物Ⅱ;

步骤为:

(1)莱克多巴胺半抗原的制备:

将章鱼胺和乙酰丙酸乙酯按摩尔比1:1混合,在甲醇溶液中,每1mmol章鱼胺用0.5 mL三乙胺催化下,室温条件下,通过氰基硼氢化钠还原,每1mmol章鱼胺用1.1mmol氰基硼氢化钠还原反应12h得到中间产物;

将中间产物在碱性条件水解,得到含活性羧基的分子,作为莱克多巴胺半抗原,即化合物I;化合物I的结构式如式I所示:式I;

(2)莱克多巴胺人工抗原的制备:

(A)将化合物I用N,N-二甲基甲酰胺DMF溶解,化合物I与N-羟基琥珀酰亚胺NHS,

1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC的摩尔比为1: 1.5: 2,在4℃避光搅拌反应1h,再在室温反应12h,得活化的莱克多巴胺半抗原溶液;

取牛血清白蛋白,化合物I与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1,将牛血清白蛋白用0.1M pH9.6 碳酸盐缓冲液溶解,其中溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL,且碳酸盐缓冲液与N,N-二甲基甲酰胺DMF的体积比例为5:1;将活化的莱克多巴胺半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中,室温下反应24h,用PBS缓冲液透析2天,期间更换PBS缓冲液4次,即得到莱克多巴胺人工抗原,即化合物Ⅱ;化合物Ⅱ的结构式如式Ⅱ所示:式Ⅱ;

或(B)将化合物I用N,N-二甲基甲酰胺DMF溶解,化合物I与三正丁胺,氯甲酸异丁酯的摩尔比为1: 1.2: 1.2, 0℃反应1h,得活化的莱克多巴胺半抗原溶液;

取牛血清白蛋白,化合物I与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1,将牛血清白蛋白用 0.1M pH9.6 碳酸盐缓冲液溶解,0℃预冷30min,其中溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL,且碳酸盐缓冲液与N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的体积比例为5:1;在0℃条件下,将活化的莱克多巴胺半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中,0℃条件下反应1h,然后室温反应

24h,用PBS缓冲液透析2天,期间更换PBS缓冲液4次,即得到莱克多巴胺人工抗原,即化合物Ⅱ。

2.根据权利要求1所述莱克多巴胺人工抗原的合成方法,其特征在于:所述的载体蛋白牛血清白蛋白BSA被替换为匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH、鸡卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HSA之一种。

3.用权利要求1所述方法合成的莱克多巴胺人工抗原的应用,其特征在于制备莱克多巴胺抗体,所述抗体为多克隆抗体和/或单克隆抗体。

4.用权利要求1所述方法合成的莱克多巴胺人工抗原的应用,其特征在于检测食品中莱克多巴胺残留。